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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【问题反馈】求助转化问题
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欣如止水

金虫 (小有名气)

[交流] 【问题反馈】求助转化问题 已有3人参与

用特异性引物扩增出与目的片段大小相同的片段割胶回收用于转化，片段长度1700bp左右，转化载体为pMD19-T，转化后M13引物验证，在1700bp处有条带，交于测序，可测序结果总是与目的片段不相符合，甚至与扩增目的片段的质粒上都无相似序列。请各位高手指点，到底是什么问题啊？
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1楼 2010-04-30 11:33:14
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liyong1981

金虫 (正式写手)
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1949stone(金币+1): 2010-04-30 12:31
那就是你扩增的不是你的目的片段了撒，这种情况时有的，记得很久以前，做RACE的时候，我的3端阔出来的，测序发现，根本不是我想要得到的片段，扩初的别的来了，而且很漂亮的带
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2楼2010-04-30 11:36:35
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欣如止水

金虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1): 2010-04-30 12:31

那就是你扩增的不是你的目的片段了撒，这种情况时有的，记得很久以前，做RACE的时候，我的3端阔出来的，测序发现，根本不是我想要得到的片段，扩初的别的来了，而且很漂亮的带

那要怎样解决啊？
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3楼2010-05-04 10:11:14
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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重新设计引物～～
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4楼2010-05-04 10:23:06
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cato8163

银虫 (正式写手)
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你在转化后用菌液PCR检测时，用一条M13引物、一条目的条带引物，这样再去测序。这样不足之处是：只能检测到正向的或反向的。需多做菌液PCR。

[ Last edited by cato8163 on 2010-5-4 at 11:17 ]
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5楼2010-05-04 11:06:27
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