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[交流]
一个关于感受态转化效率的问题
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| 无论是电转还是化学转化，多少的转化率才是达到了理想值，既是涂板培养12小时后菌落数量达到多少？我之前做得都是化学法培养2天也就出那么3几个，最近做了超级感受态，也用了电转，12小时之后就能长出来8个了，老师还嫌感受态转化效率低，求解。《分子克隆》上说电转的效率有10的7次方~10的8次方,那么这个7次方8次方是怎么得到的？在平板上是个怎么样的表现？ |
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 分子生化实验经验积累 | 蛋白表达纯化与检测 |
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如果你要确定感受态细胞的转化效率，可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中，取一部分转化的细菌，涂布到选择培养基上，可用菌落生长单位/μg DNA，按下面的方法计算感受态细胞的转化效率。计算公式：转化效率＝产生菌落的总数/铺板DNA的总量。 例如，取1μl（0.1ng/μl）完整的质粒转化100μl的感受态细胞。向转化反应液中加入900μl培养液，让细菌恢复一小段时间，取100μl铺板.培养过夜，产生1000个菌落。转化0.1ng DNA，用SOC稀释到1000μl后，取1/10涂平板，则涂平板共用0.01ng DNA 质粒，所以转化率＝1000克隆/0.01ng DNA =105cfu/ng=10的8次方cfu/μg。 一般转化效率1×10的6次方cfu/μg DNA可满足普通的亚克隆实验；1×10的7次方cfu/μg DNA用于作更复杂的亚克隆，有限量的DNA的转化，T-克隆实验；构建文库和突变要求用的转化的效率为>1×10的8次方cfu/μg DNA。 |
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冰风颤木11楼2011-09-09 10:14:13
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