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Hliotrope

木虫 (著名写手)

[求助] 电转化DH5α感受态 已有3人参与

最近要建基因组文库,需要电转化DH5α感受态,有没有哪位虫友做过电转化DH5α感受态的制备,方法是什么?谢谢~~
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Someone
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枫桥书生

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-06 16:25:44
gyesang: 应助指数+1 2014-04-11 00:31:09
与热激法最大的区别是转化需要的菌体浓度要高得多,因为电击中有70%以上的菌体会死亡。其次是菌体的离子浓度不能高,不然电击中会产生电弧,所以热激用的氯化钙被替换为10%甘油,用于悬浮和保存。具体方法你可以参照bio-rad公司电转仪的使用手册,或者具体的某篇文献。点转方法1990年左右就已成熟,很多文献采用和改进的报道。

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3楼2014-04-06 10:41:36
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普通回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近我也在做,我采用的是热激转化,没成功
2楼2014-04-06 10:13:10
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 枫桥书生 at 2014-04-06 10:41:36
与热激法最大的区别是转化需要的菌体浓度要高得多,因为电击中有70%以上的菌体会死亡。其次是菌体的离子浓度不能高,不然电击中会产生电弧,所以热激用的氯化钙被替换为10%甘油,用于悬浮和保存。具体方法你可以参照 ...

好的,谢谢。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Someone
4楼2014-04-06 22:08:31
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-06 10:13:10
最近我也在做,我采用的是热激转化,没成功

你也建文库?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Someone
5楼2014-04-06 22:09:25
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Neo2000

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我这里可以帮你做感受态,质优价廉

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-04-06 22:41:32
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-06 22:41:32
我这里可以帮你做感受态,质优价廉

呵呵,这倒不用,自己能做。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Someone
7楼2014-04-06 22:48:44
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樊樊

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-06 22:09:25
你也建文库?
...

,看到也字就一阵心酸,我也在建。看人们说的TA连接简单的跟一一样,为什么我连最基本的都长不出来,后面怎么办、、
你做到什么程度了?
8楼2014-04-08 09:58:54
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-08 09:58:54
,看到也字就一阵心酸,我也在建。看人们说的TA连接简单的跟一一样,为什么我连最基本的都长不出来,后面怎么办、、
你做到什么程度了?...

刚提出基因组,确定完了酶切时间,现在正做酶切这一步,建库连的是T载体么?好像不是吧。。。我们用的是买的一个载体,名字忘了。。。
Someone
9楼2014-04-08 10:14:21
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樊樊

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-08 10:14:21
刚提出基因组,确定完了酶切时间,现在正做酶切这一步,建库连的是T载体么?好像不是吧。。。我们用的是买的一个载体,名字忘了。。。...

16s 文库  TA连接,载体是pmd18-T
10楼2014-04-08 19:24:17
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