应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌DH5α感受态制备
221/3返回列表123下一页
查看: 4241  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yousliyun

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌DH5α感受态制备

连续做了3次大肠杆菌DH5α感受态，转化后一个斑也没长，找不到是什么原因。
菌株用的是买的天根大肠杆菌DH5α感受态细胞，直接画线，摇菌，在操作过程中Cacl2可能多加了点，其他没什么大问题。
希望帮忙分析一下，是什么原因哪？快做崩溃了。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学资料 分子生物实验相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-05 14:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

萝卜丝儿

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 可以考虑一下 2012-04-06 09:06:53
用感受态细胞划线培养，摇菌，应该没什么问题，因为我们实验室有人这样干过，做出来的细胞效率也很高的，不过你用的是买来的感受态细胞，我就不能肯定了。而且我也不知道楼主用的是那个protocol做的感受态，我用过inoue法和hanahan法，前者效率更高一点。实在不行可以换方法做。
赞一下(1人) 回复此楼
好好学习，天天向上！
7楼2012-04-05 21:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

ICDC

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励新虫 2012-04-05 18:34:07
不知lz转化的是质粒还是片段？质粒是闭合环状，很难被宿主的RE系统降解，转化效率自然很高。

lz为什么不直接用购买的感受态做转化呢？还非得自己制备？

另：如果追求高效率的话，可以尝试电转，操作简单，转化效率高。
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-05 15:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励新虫积极交流 2012-04-05 18:34:21
买的感受态再拿来做感受态的话，效果可能没有用菌种做的好，我们也试过，转化效果很差。不过有时是因为你的质粒。我们做的时候用TFN BUFFER,不是单纯的Cacl2,效果比较好。你可以试试。
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-05 15:39:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 确实应该先拿质粒检测下感受态的效率 2012-04-05 18:35:16
嗯·.........................
我觉得还是用常用的阳性质粒检测一下吧，我们一般用pBSK+/-，这种质粒转化后一般一涂一大板，如果这都出不来的话那就是你的感受态制作有问题，或者转化有问题，制作感受态时尽量低温操作哦
希望有所帮助 若有说错请高手指点哦
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
4楼2012-04-05 15:42:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
刚看到你拿感受态再划线..............
有这样的吗
制感受态的菌一般都尽量不要传代和冻融的...........
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
5楼2012-04-05 15:45:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifuzhu3838

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励积极交流哦 2012-04-06 09:06:32
做好的感受态应该涂一个阴性（随便加种抗性：AMP）和一个阳性（无抗性的平板）的试验板。先把买来的感受态接种摇过夜，第二天转接后制作感受态，现在很流行用TSS法做，效果很好
赞一下 回复此楼
活到老学到老
6楼2012-04-05 21:40:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是你板子的问题，抗生素加多了？试试涂个阳性菌/////或者一个菌种，我用的top10感觉很不错
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-05 21:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
★
西瓜: 金币+1, 谢谢捧场~ 2012-04-06 12:12:00
DH5α感受态细胞  和DH5α菌是两回事！
你说的不太清楚，没看明白。

至于CaCL2多加不是问题，他们有的超级感受态的制作就是CaCl2多加的。我倒是没亲自多加过，但说的人应该不会骗我。用过他们那个，是比我们的长的多。
赞一下 回复此楼
我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
9楼2012-04-05 22:43:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白虾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流~帅哥啊 2012-04-06 12:12:16
买来的感受态是不能再画线培养制备感受台的
他们对出售的感受态进行过改造，无法使用；我们实验室之前也做过，效果特别不好
赞一下 回复此楼
飞的更高
10楼2012-04-05 22:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yousliyun 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +12 kulium 2026-08-21 15/750 2026-08-24 12:02 by iaeyuan
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭