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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌DH5α感受态制备
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lincy2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小白虾 at 2012-04-05 22:49:13:
买来的感受态是不能再画线培养制备感受台的
他们对出售的感受态进行过改造，无法使用；我们实验室之前也做过，效果特别不好

请问那买来的感受态可以划线完了后做电转吗？这个效率怎么样？
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耐得住寂寞，方能遇见繁华
11楼2012-04-05 22:56:22
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yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是你在制备感受态之前摇菌时间太长了？菌体如果老化了会严重影响感受态的转化效率，好好控制一下感受态制备前的OD试试
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12楼2012-04-06 09:42:57
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-06 12:12:41
买来的感受态是可以用来重新做的，我们实验室做过的，只是单纯的氯化钙法我们现在基本不用了，用的都是改进的方法，比如：TSS法，PIPES法等，效率都挺高的，楼主可以试一下
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13楼2012-04-06 10:01:36
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yousliyun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小白虾 at 2012-04-05 22:49:13:
买来的感受态是不能再画线培养制备感受台的
他们对出售的感受态进行过改造，无法使用；我们实验室之前也做过，效果特别不好

买来的感受态不能用来划斑？它们经过什么特殊处理吗？谢谢
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14楼2012-04-06 10:41:51
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泡泡9706

银虫 (小有名气)
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-06 17:38:29
氯化钙法制备DH5a感受态细胞：
1.DH5a平板上挑去单菌落于8mL LB液体培养基，37度200rpm过夜培养；
2.次日以1%-2%接种量转接于新的LB液体培养基，37度培养至OD600为0.4-0.6；
3.将培养物冰浴15min或以上；
4.4摄氏度，6000-7000 rpm离心5 min收集菌体；
5.用0.1 M氯化钙重悬，离心；
6.加0.1 M氯化钙重悬菌体，冰上放置15 min；
7.离心，菌体沉淀用适量0.1M氯化钙重悬，24 h内可直接用于转化。
OD600=0.4-0.6的培养液，每1.5 mL可制备一管100 uL的感受态。整个操作都在冰上或者4度进行。
我们都是用这个方法，效率很高的，楼主看看是不是有什么不一样的。
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15楼2012-04-06 14:16:22
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didadi123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室也用买来的感受态摇菌做过感受态，效果可以。我觉得lz应该是基因或连接的原因，建议用阳性克隆测试下转化效率。祝好
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16楼2012-04-06 20:31:37
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yousliyun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小白虾 at 2012-04-05 22:49:13:
买来的感受态是不能再画线培养制备感受台的
他们对出售的感受态进行过改造，无法使用；我们实验室之前也做过，效果特别不好

谢谢，我改了菌株，做的感受态效果还行了
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17楼2012-04-14 19:43:28
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
18楼2012-04-15 09:52:29
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快到碗里来

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感受态的E.coli放置时间长了会不会失活  还有用感受态的E.coli培养出来的是E.coli不具备感受态特征对吗
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快到碗里来你才到碗里来
19楼2012-11-16 10:05:13
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summergca

铜虫 (初入文坛)
天根的感受态说不定污染了...
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20楼2012-11-30 16:53:37
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