应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌DH5α感受态制备
222/3返回列表上一页123下一页
查看: 4041  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lincy2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小白虾 at 2012-04-05 22:49:13:
买来的感受态是不能再画线培养制备感受台的
他们对出售的感受态进行过改造，无法使用；我们实验室之前也做过，效果特别不好

请问那买来的感受态可以划线完了后做电转吗？这个效率怎么样？
赞一下 回复此楼
耐得住寂寞，方能遇见繁华
11楼2012-04-05 22:56:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是你在制备感受态之前摇菌时间太长了？菌体如果老化了会严重影响感受态的转化效率，好好控制一下感受态制备前的OD试试
赞一下 回复此楼
12楼2012-04-06 09:42:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-06 12:12:41
买来的感受态是可以用来重新做的，我们实验室做过的，只是单纯的氯化钙法我们现在基本不用了，用的都是改进的方法，比如：TSS法，PIPES法等，效率都挺高的，楼主可以试一下
赞一下 回复此楼
13楼2012-04-06 10:01:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yousliyun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小白虾 at 2012-04-05 22:49:13:
买来的感受态是不能再画线培养制备感受台的
他们对出售的感受态进行过改造，无法使用；我们实验室之前也做过，效果特别不好

买来的感受态不能用来划斑？它们经过什么特殊处理吗？谢谢
赞一下 回复此楼
14楼2012-04-06 10:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡泡9706

银虫 (小有名气)
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-06 17:38:29
氯化钙法制备DH5a感受态细胞：
1.DH5a平板上挑去单菌落于8mL LB液体培养基，37度200rpm过夜培养；
2.次日以1%-2%接种量转接于新的LB液体培养基，37度培养至OD600为0.4-0.6；
3.将培养物冰浴15min或以上；
4.4摄氏度，6000-7000 rpm离心5 min收集菌体；
5.用0.1 M氯化钙重悬，离心；
6.加0.1 M氯化钙重悬菌体，冰上放置15 min；
7.离心，菌体沉淀用适量0.1M氯化钙重悬，24 h内可直接用于转化。
OD600=0.4-0.6的培养液，每1.5 mL可制备一管100 uL的感受态。整个操作都在冰上或者4度进行。
我们都是用这个方法，效率很高的，楼主看看是不是有什么不一样的。
赞一下 回复此楼
15楼2012-04-06 14:16:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didadi123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室也用买来的感受态摇菌做过感受态，效果可以。我觉得lz应该是基因或连接的原因，建议用阳性克隆测试下转化效率。祝好
赞一下 回复此楼
16楼2012-04-06 20:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yousliyun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小白虾 at 2012-04-05 22:49:13:
买来的感受态是不能再画线培养制备感受台的
他们对出售的感受态进行过改造，无法使用；我们实验室之前也做过，效果特别不好

谢谢，我改了菌株，做的感受态效果还行了
赞一下 回复此楼
17楼2012-04-14 19:43:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghs25372216

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
18楼2012-04-15 09:52:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快到碗里来

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感受态的E.coli放置时间长了会不会失活  还有用感受态的E.coli培养出来的是E.coli不具备感受态特征对吗
赞一下 回复此楼
快到碗里来你才到碗里来
19楼2012-11-16 10:05:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

summergca

铜虫 (初入文坛)
天根的感受态说不定污染了...
赞一下 回复此楼
20楼2012-11-30 16:53:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yousliyun 的主题更新
222/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] E0414, 我的本子有没有希望？ +7 布布和一二 2026-06-17 9/450 2026-06-21 19:29 by 布布和一二
[考研] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 19:18 by q1p9ixelzp
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:58 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:00 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:40 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:37 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:25 by ky8v3skvft
[考博] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:20 by ky8v3skvft
[博后之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 6/300 2026-06-21 17:05 by ky8v3skvft
[公派出国] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:00 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +5 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:57 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +3 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 16:45 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:40 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章，我:8O5.51.O.54,科目齐全,可＋急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 9/450 2026-06-21 16:37 by ky8v3skvft
[基金申请] 青A35岁以下通知答辩了吗 +3 暨阳一只柴 2026-06-17 3/150 2026-06-21 09:39 by kudofaye
[考博] 【全奖博士/科研助理/博后招生】新加坡南洋理工大学机械与航空航天学院 +3 robohaha 2026-06-15 4/200 2026-06-21 00:36 by lanbing1
[硕博家园] 一篇论文同时出现在两个期刊，一模一样，这算不算学术不端，请各位老师斧正。 +11 mahl005 2026-06-14 12/600 2026-06-18 17:01 by 770904134
[基金申请] 希望面上有个好结果 +7 碧水00 2026-06-16 7/350 2026-06-18 12:18 by wuke100666
[论文投稿] 三区计算机方向期刊推荐 +5 1457340941 2026-06-15 5/250 2026-06-17 13:16 by 会议编辑
[论文投稿] sci论文二审求助 +5 潘倍倍 2026-06-15 5/250 2026-06-16 10:15 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭