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大肠杆菌DH5α感受态制备
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连续做了3次大肠杆菌DH5α感受态，转化后一个斑也没长，找不到是什么原因。 菌株用的是买的天根大肠杆菌DH5α感受态细胞，直接画线，摇菌，在操作过程中Cacl2可能多加了点，其他没什么大问题。 希望帮忙分析一下，是什么原因哪？快做崩溃了。  |
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泡泡9706
银虫 (小有名气)
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西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-06 17:38:29
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-06 17:38:29
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氯化钙法制备DH5a感受态细胞： 1.DH5a平板上挑去单菌落于8mL LB液体培养基，37度200rpm过夜培养； 2.次日以1%-2%接种量转接于新的LB液体培养基，37度培养至OD600为0.4-0.6； 3.将培养物冰浴15min或以上； 4.4摄氏度，6000-7000 rpm离心5 min收集菌体； 5.用0.1 M氯化钙重悬，离心； 6.加0.1 M氯化钙重悬菌体，冰上放置15 min； 7.离心，菌体沉淀用适量0.1M氯化钙重悬，24 h内可直接用于转化。 OD600=0.4-0.6的培养液，每1.5 mL可制备一管100 uL的感受态。整个操作都在冰上或者4度进行。 我们都是用这个方法，效率很高的，楼主看看是不是有什么不一样的。 |
15楼2012-04-06 14:16:22
ICDC
木虫 (初入文坛)
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- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
2楼2012-04-05 15:06:41
yuluoqiutong
木虫 (正式写手)
初出茅庐
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3楼2012-04-05 15:39:00
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
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4楼2012-04-05 15:42:25