应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌DH5α感受态制备
51/1返回列表
查看: 4380  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yousliyun

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌DH5α感受态制备

连续做了3次大肠杆菌DH5α感受态，转化后一个斑也没长，找不到是什么原因。
菌株用的是买的天根大肠杆菌DH5α感受态细胞，直接画线，摇菌，在操作过程中Cacl2可能多加了点，其他没什么大问题。
希望帮忙分析一下，是什么原因哪？快做崩溃了。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学资料 分子生物实验相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-05 14:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 确实应该先拿质粒检测下感受态的效率 2012-04-05 18:35:16
嗯·.........................
我觉得还是用常用的阳性质粒检测一下吧，我们一般用pBSK+/-，这种质粒转化后一般一涂一大板，如果这都出不来的话那就是你的感受态制作有问题，或者转化有问题，制作感受态时尽量低温操作哦
希望有所帮助 若有说错请高手指点哦
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
4楼2012-04-05 15:42:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

ICDC

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励新虫 2012-04-05 18:34:07
不知lz转化的是质粒还是片段？质粒是闭合环状，很难被宿主的RE系统降解，转化效率自然很高。

lz为什么不直接用购买的感受态做转化呢？还非得自己制备？

另：如果追求高效率的话，可以尝试电转，操作简单，转化效率高。
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-05 15:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励新虫积极交流 2012-04-05 18:34:21
买的感受态再拿来做感受态的话，效果可能没有用菌种做的好，我们也试过，转化效果很差。不过有时是因为你的质粒。我们做的时候用TFN BUFFER,不是单纯的Cacl2,效果比较好。你可以试试。
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-05 15:39:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
刚看到你拿感受态再划线..............
有这样的吗
制感受态的菌一般都尽量不要传代和冻融的...........
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
5楼2012-04-05 15:45:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭