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yousliyun

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌DH5α感受态制备

连续做了3次大肠杆菌DH5α感受态,转化后一个斑也没长,找不到是什么原因。
菌株用的是买的天根大肠杆菌DH5α感受态细胞,直接画线,摇菌,在操作过程中Cacl2可能多加了点,其他没什么大问题。
希望帮忙分析一下,是什么原因哪?快做崩溃了。
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

刚看到你拿感受态再划线..............
有这样的吗
制感受态的菌一般都尽量不要传代和冻融的...........
Let God do with it as He wills
5楼2012-04-05 15:45:24
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ICDC

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励新虫 2012-04-05 18:34:07
不知lz转化的是质粒还是片段?质粒是闭合环状,很难被宿主的RE系统降解,转化效率自然很高。

lz为什么不直接用购买的感受态做转化呢?还非得自己制备?

另:如果追求高效率的话,可以尝试电转,操作简单,转化效率高。
2楼2012-04-05 15:06:41
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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励新虫积极交流 2012-04-05 18:34:21
买的感受态再拿来做感受态的话,效果可能没有用菌种做的好,我们也试过,转化效果很差。不过有时是因为你的质粒。我们做的时候用TFN BUFFER,不是单纯的Cacl2,效果比较好。你可以试试。
3楼2012-04-05 15:39:00
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 确实应该先拿质粒检测下感受态的效率 2012-04-05 18:35:16
嗯·.........................
我觉得还是用常用的阳性质粒检测一下吧,我们一般用pBSK+/-,这种质粒转化后一般一涂一大板,如果这都出不来的话那就是你的感受态制作有问题,或者转化有问题,制作感受态时尽量低温操作哦
希望有所帮助 若有说错请高手指点哦
Let God do with it as He wills
4楼2012-04-05 15:42:25
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