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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 培养感受态大肠杆菌，请问长出来这样的菌株正常么？连续两天都是这样的（见图）
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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)

[求助] 培养感受态大肠杆菌，请问长出来这样的菌株正常么？连续两天都是这样的（见图） 已有4人参与

打算将目的基因片段连接到载体上，再导入到大肠杆菌做蓝白斑筛选，这次是想试试，用涂布器在LB培养基上涂布，未加IPTG和X-Gal。LB培养基有些硬，不知是培养基偏碱还是琼脂放多了。固体培养基配了200ml,琼脂放了4克。

培养感受态大肠杆菌，请问长出来这样的菌株正常么？连续两天都是这样的（见图）
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培养感受态大肠杆菌，请问长出来这样的菌株正常么？连续两天都是这样的（见图）-1
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培养感受态大肠杆菌，请问长出来这样的菌株正常么？连续两天都是这样的（见图）-2
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培养感受态大肠杆菌，请问长出来这样的菌株正常么？连续两天都是这样的（见图）-3
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培养感受态大肠杆菌，请问长出来这样的菌株正常么？连续两天都是这样的（见图）-4
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培养感受态大肠杆菌，请问长出来这样的菌株正常么？连续两天都是这样的（见图）-5
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1楼 2014-03-20 19:58:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

rv1nm2y

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 冰糖-葫芦娃 at 2014-03-23 17:44:50
是啊。。那下一步我想挑周边的一些单菌落做一下PCR，想看看目的片段转没转到质粒上，是将单菌落挑到加有氨苄的LB液体培养基里培养过夜，然后用这个菌液直接PCR么？还是提取质粒做PCR？如果这样该如何操作呢？有些茫 ...

做菌落PCR吧。我做的是真菌，就是挑取少量菌落放在离心管里，离心管里有专门溶解菌壁的酶，随后在37℃条件下放置3小时作用，使反应充分。
随后就是按照PCR的配置方法，直接吸取菌做PCR，跑琼脂糖电泳，如果条带很亮，就是阳性，那么就是转进去了，如果比较暗，有可能是假阳性，则可能转进去可能没转进去，如果没有，那就是没转进去。

仅作参考，毕竟菌不一样
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8楼2014-03-24 14:53:54
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奔子3802

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不对吧，应该是一个小点一个小点儿的，长满整个平皿
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9楼2014-03-24 16:40:12
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普通回帖

你的梦想

新虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
2楼2014-03-20 23:04:46
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清逸凌风

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰糖-葫芦娃: 金币+5 2014-04-08 20:45:23
琼脂加的量为：15-20g/L 琼脂4g 应该没什么问题！抗性什么 A K C要不要加，感觉你好像都没怎么涂开啊！
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3楼2014-03-21 09:23:48
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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 清逸凌风 at 2014-03-21 09:23:48
琼脂加的量为：15-20g/L 琼脂4g 应该没什么问题！抗性什么 A K C要不要加，感觉你好像都没怎么涂开啊！

应该如何涂布呢？我最近才刚开始学微生物培养，还不大会操作，多谢赐教~
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4楼2014-03-21 12:55:00
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清逸凌风

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

要是不会的话，可以找找有关微生物实验的书看看，其实蛮简单的，最重要的是要涂开涂均匀了，不然菌长在一起就会出现上面的情况。
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5楼2014-03-22 12:41:46
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+2, 多多交流 2014-03-23 23:45:29
额，字体要不要这么大啊。。写边上标注就好了- -
我感觉琼脂在2%左右比较好，少加点吧，菌落这样，，LZ涂布水平有待提高。。
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6楼2014-03-23 10:12:30
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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by rv1nm2y at 2014-03-23 10:12:30
额，字体要不要这么大啊。。写边上标注就好了- -
我感觉琼脂在2%左右比较好，少加点吧，菌落这样，，LZ涂布水平有待提高。。

是啊。。那下一步我想挑周边的一些单菌落做一下PCR，想看看目的片段转没转到质粒上，是将单菌落挑到加有氨苄的LB液体培养基里培养过夜，然后用这个菌液直接PCR么？还是提取质粒做PCR？如果这样该如何操作呢？有些茫然啊~
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7楼2014-03-23 17:44:50
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张晓雨2013

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

首先你的培养基琼脂微多，200ml你加3g就差不多了，其次你菌液是不是加多了啊，以至于根本涂不均匀，我觉得你菌液一定是多了，还有就是抗生素你加了吗？是在什么情况加的，会不会是温度太高的时候加的，你的抗生素失效了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学习和娱乐都要有哦
10楼2014-03-25 16:57:03
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