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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 培养感受态大肠杆菌，请问长出来这样的菌株正常么？连续两天都是这样的（见图）已有4人参与

打算将目的基因片段连接到载体上，再导入到大肠杆菌做蓝白斑筛选，这次是想试试，用涂布器在LB培养基上涂布，未加IPTG和X-Gal。LB培养基有些硬，不知是培养基偏碱还是琼脂放多了。固体培养基配了200ml,琼脂放了4克。

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1楼2014-03-20 19:58:10

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rv1nm2y

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 冰糖-葫芦娃 at 2014-03-23 17:44:50
是啊。。那下一步我想挑周边的一些单菌落做一下PCR，想看看目的片段转没转到质粒上，是将单菌落挑到加有氨苄的LB液体培养基里培养过夜，然后用这个菌液直接PCR么？还是提取质粒做PCR？如果这样该如何操作呢？有些茫 ...

做菌落PCR吧。我做的是真菌，就是挑取少量菌落放在离心管里，离心管里有专门溶解菌壁的酶，随后在37℃条件下放置3小时作用，使反应充分。
随后就是按照PCR的配置方法，直接吸取菌做PCR，跑琼脂糖电泳，如果条带很亮，就是阳性，那么就是转进去了，如果比较暗，有可能是假阳性，则可能转进去可能没转进去，如果没有，那就是没转进去。

仅作参考，毕竟菌不一样