24小时热门版块排行榜    

查看: 1963  |  回复: 16

Hliotrope

木虫 (著名写手)

[求助] 电转化DH5α感受态 已有3人参与

最近要建基因组文库,需要电转化DH5α感受态,有没有哪位虫友做过电转化DH5α感受态的制备,方法是什么?谢谢~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Someone
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

枫桥书生

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-06 16:25:44
gyesang: 应助指数+1 2014-04-11 00:31:09
与热激法最大的区别是转化需要的菌体浓度要高得多,因为电击中有70%以上的菌体会死亡。其次是菌体的离子浓度不能高,不然电击中会产生电弧,所以热激用的氯化钙被替换为10%甘油,用于悬浮和保存。具体方法你可以参照bio-rad公司电转仪的使用手册,或者具体的某篇文献。点转方法1990年左右就已成熟,很多文献采用和改进的报道。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-04-06 10:41:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近我也在做,我采用的是热激转化,没成功
2楼2014-04-06 10:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hliotrope

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 枫桥书生 at 2014-04-06 10:41:36
与热激法最大的区别是转化需要的菌体浓度要高得多,因为电击中有70%以上的菌体会死亡。其次是菌体的离子浓度不能高,不然电击中会产生电弧,所以热激用的氯化钙被替换为10%甘油,用于悬浮和保存。具体方法你可以参照 ...

好的,谢谢。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Someone
4楼2014-04-06 22:08:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hliotrope

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-06 10:13:10
最近我也在做,我采用的是热激转化,没成功

你也建文库?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Someone
5楼2014-04-06 22:09:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我这里可以帮你做感受态,质优价廉

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-04-06 22:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hliotrope

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-06 22:41:32
我这里可以帮你做感受态,质优价廉

呵呵,这倒不用,自己能做。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Someone
7楼2014-04-06 22:48:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-06 22:09:25
你也建文库?
...

,看到也字就一阵心酸,我也在建。看人们说的TA连接简单的跟一一样,为什么我连最基本的都长不出来,后面怎么办、、
你做到什么程度了?
8楼2014-04-08 09:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hliotrope

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-08 09:58:54
,看到也字就一阵心酸,我也在建。看人们说的TA连接简单的跟一一样,为什么我连最基本的都长不出来,后面怎么办、、
你做到什么程度了?...

刚提出基因组,确定完了酶切时间,现在正做酶切这一步,建库连的是T载体么?好像不是吧。。。我们用的是买的一个载体,名字忘了。。。
Someone
9楼2014-04-08 10:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by Hliotrope at 2014-04-08 10:14:21
刚提出基因组,确定完了酶切时间,现在正做酶切这一步,建库连的是T载体么?好像不是吧。。。我们用的是买的一个载体,名字忘了。。。...

16s 文库  TA连接,载体是pmd18-T
10楼2014-04-08 19:24:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Hliotrope 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 4/200 2026-09-01 06:07 by o3EMxHUAQDtS
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 5/250 2026-09-01 05:56 by o3EMxHUAQDtS
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 5/250 2026-09-01 05:45 by o3EMxHUAQDtS
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 5/250 2026-09-01 05:43 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见