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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大肠杆菌细胞破碎实验的一些问题？
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌细胞破碎实验的一些问题？已有1人参与

想做大肠杆菌细胞的最佳破碎条件实验
不知道对细胞进行重悬时所选择的缓冲液以及缓冲液的浓度对破碎效果是否有影响？
一般有哪些缓冲液可用来进行破碎？
然后不同的细胞浓度以及不同的细胞液总体积是不是也有影响？
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1楼2013-07-18 22:42:52
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brighten

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-19 17:37:21
不知道你想要的最佳条件指的是什么？大肠杆菌破菌一般就超声、高压匀浆和冻融，就少量细菌，可用冻融和超声，大量还是用高压匀浆吧，操作方便。超声和高压匀浆都要注意菌液温度会升高较多，需要降温处理。至于缓冲液一般都用10mMPB或Tris-HCl pH一般在7-8即可，用哪种缓冲液对破菌效果影响不大，1g菌体用5-10ml缓冲液。
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2楼2013-07-19 14:19:57
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by brighten at 2013-07-19 14:19:57
不知道你想要的最佳条件指的是什么？大肠杆菌破菌一般就超声、高压匀浆和冻融，就少量细菌，可用冻融和超声，大量还是用高压匀浆吧，操作方便。超声和高压匀浆都要注意菌液温度会升高较多，需要降温处理。至于缓冲液 ...

实验室没有匀浆机，准备用超声破碎。菌体浓度会从10%到50%都做一下。想在不同功率条件下观察时间和破碎程度的关系，确定最佳的功率和时间。破碎情况想通过OD值确定。
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3楼2013-07-19 15:13:44
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)
然后不知道大肠杆菌细胞、破碎出的蛋白与核算的最大紫外吸收波长分别是多少
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4楼2013-07-19 15:23:35
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brighten

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

破菌情况直接做电子显微镜检测就可以了啊，很清楚的说。用OD检测我没有试过，不清楚怎么弄。
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5楼2013-07-25 14:21:26
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admision

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们也是破碎大肠杆菌！
三种方法都用了！
我们的实验在小试级别！从我们目前的结果来看！细胞都破碎了！从破碎效果莱库宁是高压匀浆的好！但是从我们的实验角度来说：超声才是我们要的效果！
我们拿冻融的去超声和高压匀浆！超声的效果好多了！
新鲜的大肠，我们刚刚做好，还没有进行实验比对！不过，镜检都是破碎完全的了！
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6楼2014-01-05 10:22:52
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