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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌发酵问题
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fushxmy

金虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌发酵问题 已有19人参与

最近搞一个大肠杆菌的发酵项目，接种量是10%，初始OD是0.2，经过在发酵罐里30%的溶氧下培养至OD为8时加入0.2mM的IPTG进行诱导发酵，并且开始进行补料，经过24小时之后，OD达到20，之后的几天基本上保持在这个水平不变。下批发酵我准备提高初始OD至0.5，主要是通过摇瓶培养OD只能达到5左右，10%的接种量所以说OD只有0.5。不知道大家是如何提高OD量的，理论上E.coli在发酵罐里OD600可以达到100。下面是我的培养基配方：

种子培养基：1L

Glucose        10g;    KH2PO4    3g;      MgSO4.7H2O      0.5g;    Yeast extract        10g; NaCl         0.5g;    NH4Cl       1g

发酵培养基：1L
KH2PO4 2g;  K2HPO4 3g; (NH4)2SO4 5g; yeast extract 5g; antifoam 1ml;
Glucose 20g (恒定); MgSO4.7H2O 0.5g; VB 1mg; K12 trace metals 1ml;

用液氨调节pH=7.0
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秦皇汉武
1楼 2011-07-08 11:17:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiajungang

银虫 (正式写手)
★
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再过一两个月，我也要用发酵罐来做大肠杆菌诱导表达了，目前用的摇瓶，培养基为LB，希望与LZ多多交流。建议LZ往培养基加些微量元素混合液，如Fe, Mg。牛肉膏，玉米浆等均要加些。我们实验室培养的OD600最高可达到80。
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吃苦耐劳，勇于创新，乐观热情，积极向上！
3楼2011-07-09 21:27:23
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dami200

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
是不是灭菌不完全啊，镜检怎么样啊，
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积极向上
4楼2011-07-09 22:22:49
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普通回帖

94394220

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
理论上？那有具体的实例吗？
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2楼2011-07-08 14:21:23
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 94394220 at 2011-07-08 14:21:23:
理论上？那有具体的实例吗？

请问你们组里培养基是什么配方啊？谢谢
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秦皇汉武
5楼2011-07-11 22:27:39
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)
诱导早了
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6楼2011-07-11 22:52:09
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sspxiaoji at 2011-07-11 22:52:09:
诱导早了

能展开说说吗？谢谢
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秦皇汉武
7楼2011-07-12 02:46:30
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包工头林冲

铁虫 (初入文坛)
★
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可以加玉米浆，豆饼水解液，等
少加消泡剂，还有就是你的溶氧一直维持在30吗？
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8楼2011-07-16 20:59:21
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toto2to

铁虫 (初入文坛)
★
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培养温度是多少？感觉不是初始OD的问题，补料培养基是什么？VB是VB几？还是复合型的VB？
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9楼2011-07-17 01:09:22
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fushxmy

金虫 (正式写手)
谢谢大家，OD问题已经搞定了，现在主要是想办法控制生长速度，因为我这个代谢产物是跟生长偶联的，只有当细胞在继续生长状态才会生产目的产物。大家有什么好的建议吗？
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秦皇汉武
10楼2011-07-17 11:55:26
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