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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌发酵液的防菌
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wu2008yao

木虫 (小有名气)

[交流] 大肠杆菌发酵液的防菌

弄了一批大肠杆菌（工程菌）的发酵液，pH6.5，加什么防菌比较好，可能起始的菌落总数有10的8次方，因为离心分离的转速很低4500，希望大家能多多提些建议，谢谢啦！
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1楼 2011-10-20 10:16:36
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wu2008yao

木虫 (小有名气)
有经验的请不要吝惜啊，先顶！
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2楼2011-10-20 12:02:40
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
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wu2008yao(金币+1): 谢谢，怕时间长了，菌或者霉菌量大了后对我的酶液有影响！ 2011-10-21 09:41:12
我们都放4度冷库或者冷柜，不离心除菌放4度问题也不大，离心出菌应该更好了。
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3楼2011-10-20 16:19:52
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wu2008yao(金币+1): 要胞外液，谢谢 2011-10-21 09:41:37
你的最终目的是存菌体吗
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4楼2011-10-20 21:36:32
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)
要是存菌体最好还是离心出来，4度存不了太长时间
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5楼2011-10-20 21:37:28
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wu2008yao

木虫 (小有名气)
要发酵液，但是菌体估计除的不干净，担心时间长了变浑浊，样比较多，想是不是有些试剂可以添加进去，会很有效果？
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6楼2011-10-21 08:26:26
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wu2008yao(金币+1): 我要发酵液而非菌种，不过谢谢了！ 2011-10-21 09:39:19
scelab(金币+5): 辛苦总结了，不过确实不是。lz所问。要不你单独把此内容开贴，呵呵 2011-10-21 11:36:49
这是我总结了好多人的观点，也有我自己的观点，你看看吧，应该对你有用处。或者你把你的菌先平板画线分离，然后进行保藏，效果肯定非常的好。^_^还有好几篇关于菌种保藏的资料，看看吧^_^
如果用50%甘油生理盐水可保存更长时间。
如果有条件的话，菌种最好保存在－70，30－50％甘油可以保存半年左右。另外，如果是表达基因重组蛋白那就多提点质粒吧，质粒很容易保存，菌种不行了及时转化，反正也不麻烦。
本人的菌种负７０度保存了N年一点问题都没有。负２０度冰柜也问题不大。最怕的是那种有冷冻冷藏的冰箱，两三个月肯定基本完完。我们实验室的都保存了一两年都壮壮的，进甘油管前的菌浓度要浓缩一点。我实验室的保存3年也没有问题，我认为主要是你的冰箱温度不够低，一般用30~50%的甘油在-30℃以下的冰箱可以保存几年。-20℃的冰箱肯定保存不了多久.
不要反复冻融！
稳定的低温对甘油保存是很重要的。
其实，如果果真要长期保存菌种，最好就是冻干保存。
如果短期保存，做穿刺管几个月是没有问题的，4度保存就可以，制作和保存都很方便。
终浓度15%左右的甘油管-20保存三四个月问题不大，半年就不太好了
甘油的浓度在20-50%这个范围就可以，但关键是温度最好是在-70℃以下，其保存时间至少在1年以上。要长期保存的话，冻干保存是最理想的了。
我们用的甘油的浓度在20%，保存在－80℃的冰箱里，可以长期保存。注意在保存时菌液和甘油要混溶。
用灭菌的滤纸片涂上大肠杆菌，放进灭菌的一次性塑料尖咀离心管（1.5ml）内，置普通冰箱的冷冻室冷冻保存，此种保存方法可将菌种保存至少一年半以上，不妨试一试。
最好的办法就是把它进行冻干,可以保存数年不减毒力,我的大肠杆菌冻干保存了七年还好着呢.
最好的办法就是把它进行冻干,可以保存数年不减毒力,我的大肠杆菌冻干保存了七年还好着呢.
我用20%甘油肉汤，在-80 保存多年，且反复动融，至今长的很好
20%-50%的浓度是不是高了点啊？实验室的某些质粒感觉用25%的甘油保存，放几个月就OVER了啊？
用甘油保存于－70度，取出接种时，不要等它完全冻融，部分冻融后立即接种，剩下部分立即再置回冰箱中，这可避免反复冻融带来的对细菌的破坏。
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7楼2011-10-21 08:37:23
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shine372

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wu2008yao(金币+1): 2011-11-14 09:00:11
过0.22um的膜抽滤下 -20保存就木有问题了
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8楼2011-10-22 10:43:00
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