24小时热门版块排行榜    

查看: 1104  |  回复: 3

caobo060101

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌转化求助

本人最近用大肠杆菌BL21转化一个1K的蛋白基因片段,用的是PET30载体,转化完顺利长菌,加抗生素摇菌后总有一股发酵味,提质粒后出现4条带(如图),感觉很奇怪,我的质粒应该是6K大小,与提取质粒片段大小均不符(10K marker鉴定的)按marker显示最上边一条带在10K以上,会不会是连接出错了,而且酶切后也没有切开。大家可以给点建议吗?小弟感激不尽。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

caobo060101(金币+1): 正在p,多谢帮助 2011-05-16 14:38:08
用PCR扩增下看能出来目的条带么,不行的话就果断重新做克隆。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-05-16 13:09:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gppwfh

金虫 (正式写手)

你确定酶切还有时间正确,充分吗?一般看质粒都是酶切后断定的。
如果这个环节没有问题,可以pcr鉴定。
之后就再转化一次。
3楼2011-05-17 16:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caobo060101

新虫 (初入文坛)

好的 谢谢 哈哈
4楼2011-05-23 10:28:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 caobo060101 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 化学工程321分求调剂 +5 大米饭! 2026-03-15 5/250 2026-03-15 18:49 by a不易
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +5 很老实人 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:57 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +3 归零lbm 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:20 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +14 王晓阳- 2026-03-09 19/950 2026-03-14 02:05 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学,英一数二305分求调剂,四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 08食品或轻工求调剂,本科发表3篇sci一区top论文,一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵, 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 279求调剂 +3 莫xiao 2026-03-10 4/200 2026-03-11 08:06 by 斩魂滴兔子!
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
请填处理意见