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caobo060101

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 2
在线: 2小时
虫号: 1296654
注册: 2011-05-16
专业: 生物化学

[求助] 大肠杆菌转化求助

本人最近用大肠杆菌BL21转化一个1K的蛋白基因片段，用的是PET30载体，转化完顺利长菌，加抗生素摇菌后总有一股发酵味，提质粒后出现4条带（如图），感觉很奇怪，我的质粒应该是6K大小，与提取质粒片段大小均不符（10K marker鉴定的）按marker显示最上边一条带在10K以上，会不会是连接出错了，而且酶切后也没有切开。大家可以给点建议吗？小弟感激不尽。

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1楼 2011-05-16 11:29:51

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gppwfh

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1712.2
帖子: 343
在线: 65.6小时
虫号: 1086593
注册: 2010-09-01
专业: 生物化学

你确定酶切还有时间正确，充分吗？一般看质粒都是酶切后断定的。
如果这个环节没有问题，可以pcr鉴定。
之后就再转化一次。

3楼2011-05-17 16:36:33

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

BioEPI: 8
应助: 24 (小学生)
贵宾: 1.2
金币: 113368
散金: 1526
红花: 224
沙发: 1
帖子: 28966
在线: 3725.5小时
虫号: 464575
注册: 2007-11-21
性别: GG
专业: 神经生物学

【答案】应助回帖

caobo060101(金币+1): 正在p，多谢帮助 2011-05-16 14:38:08

用PCR扩增下看能出来目的条带么，不行的话就果断重新做克隆。

The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.

2楼2011-05-16 13:09:27

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