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caobo060101

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌转化求助

本人最近用大肠杆菌BL21转化一个1K的蛋白基因片段,用的是PET30载体,转化完顺利长菌,加抗生素摇菌后总有一股发酵味,提质粒后出现4条带(如图),感觉很奇怪,我的质粒应该是6K大小,与提取质粒片段大小均不符(10K marker鉴定的)按marker显示最上边一条带在10K以上,会不会是连接出错了,而且酶切后也没有切开。大家可以给点建议吗?小弟感激不尽。
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

caobo060101(金币+1): 正在p,多谢帮助 2011-05-16 14:38:08
用PCR扩增下看能出来目的条带么,不行的话就果断重新做克隆。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-05-16 13:09:27
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gppwfh

金虫 (正式写手)

你确定酶切还有时间正确,充分吗?一般看质粒都是酶切后断定的。
如果这个环节没有问题,可以pcr鉴定。
之后就再转化一次。
3楼2011-05-17 16:36:33
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caobo060101

新虫 (初入文坛)

好的 谢谢 哈哈
4楼2011-05-23 10:28:35
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