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caobo060101

新虫 (初入文坛)

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[求助] 大肠杆菌转化求助

本人最近用大肠杆菌BL21转化一个1K的蛋白基因片段，用的是PET30载体，转化完顺利长菌，加抗生素摇菌后总有一股发酵味，提质粒后出现4条带（如图），感觉很奇怪，我的质粒应该是6K大小，与提取质粒片段大小均不符（10K marker鉴定的）按marker显示最上边一条带在10K以上，会不会是连接出错了，而且酶切后也没有切开。大家可以给点建议吗？小弟感激不尽。

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1楼 2011-05-16 11:29:51

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

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【答案】应助回帖

caobo060101(金币+1): 正在p，多谢帮助 2011-05-16 14:38:08

用PCR扩增下看能出来目的条带么，不行的话就果断重新做克隆。

The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.

2楼2011-05-16 13:09:27

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gppwfh

金虫 (正式写手)

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你确定酶切还有时间正确，充分吗？一般看质粒都是酶切后断定的。
如果这个环节没有问题，可以pcr鉴定。
之后就再转化一次。

3楼2011-05-17 16:36:33

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caobo060101

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好的谢谢哈哈

4楼2011-05-23 10:28:35

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