24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 6026  |  回复: 28

fushxmy

金虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌发酵问题已有19人参与

最近搞一个大肠杆菌的发酵项目,接种量是10%,初始OD是0.2,经过在发酵罐里30%的溶氧下培养至OD为8时加入0.2mM的IPTG进行诱导发酵,并且开始进行补料,经过24小时之后,OD达到20,之后的几天基本上保持在这个水平不变。下批发酵我准备提高初始OD至0.5,主要是通过摇瓶培养OD只能达到5左右,10%的接种量所以说OD只有0.5。不知道大家是如何提高OD量的,理论上E.coli在发酵罐里OD600可以达到100。下面是我的培养基配方:

种子培养基:1L

Glucose        10g;    KH2PO4    3g;      MgSO4.7H2O      0.5g;    Yeast extract        10g; NaCl         0.5g;    NH4Cl       1g

发酵培养基:1L
KH2PO4 2g;  K2HPO4 3g; (NH4)2SO4 5g; yeast extract 5g; antifoam 1ml;
Glucose 20g (恒定); MgSO4.7H2O 0.5g; VB 1mg; K12 trace metals 1ml;

用液氨调节pH=7.0
回复此楼
秦皇汉武
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiajungang

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
再过一两个月,我也要用发酵罐来做大肠杆菌诱导表达了,目前用的摇瓶,培养基为LB,希望与LZ多多交流。建议LZ往培养基加些微量元素混合液,如Fe, Mg。牛肉膏,玉米浆等均要加些。我们实验室培养的OD600最高可达到80。
吃苦耐劳,勇于创新,乐观热情,积极向上!
3楼2011-07-09 21:27:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dami200

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
是不是灭菌不完全啊,镜检怎么样啊,
积极向上
4楼2011-07-09 22:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

94394220

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
理论上?那有具体的实例吗?
2楼2011-07-08 14:21:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fushxmy

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 94394220 at 2011-07-08 14:21:23:
理论上?那有具体的实例吗?

请问你们组里培养基是什么配方啊?谢谢
秦皇汉武
5楼2011-07-11 22:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sspxiaoji

银虫 (正式写手)

诱导早了
6楼2011-07-11 22:52:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fushxmy

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by sspxiaoji at 2011-07-11 22:52:09:
诱导早了

能展开说说吗?谢谢
秦皇汉武
7楼2011-07-12 02:46:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

包工头林冲

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
可以加玉米浆,豆饼水解液,等
少加消泡剂,还有就是你的溶氧一直维持在30吗?
8楼2011-07-16 20:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

toto2to

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
培养温度是多少?感觉不是初始OD的问题,补料培养基是什么?VB是VB几?还是复合型的VB?
9楼2011-07-17 01:09:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fushxmy

金虫 (正式写手)

谢谢大家,OD问题已经搞定了,现在主要是想办法控制生长速度,因为我这个代谢产物是跟生长偶联的,只有当细胞在继续生长状态才会生产目的产物。大家有什么好的建议吗?
秦皇汉武
10楼2011-07-17 11:55:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fushxmy 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见