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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌培养及破碎
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fdjzhang

铜虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌培养及破碎 已有2人参与

之前培养重组大肠杆菌（宿主是BL21），诱导10h，离心然后破碎10min，菌液便可澄清，但是现在破碎破不出来，破很长时间还是白色的，不知道哪里出了问题，条件都和原来一模一样，请高手们帮帮忙啊
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1楼 2011-08-29 22:26:20
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-30 18:42:25
如果你有做对照可以发现，破碎时间足够了，为什么不像对照一样澄清，但是对着光看，发现其实是透光的。因为重组蛋白是包函体，表达量很大，无论怎么破碎，还是不会澄清。你可以把样品进行离心，沉淀是一堆较厚白色的物体，那不是菌体，是蛋白！
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

fdjzhang
2楼2011-08-30 08:54:10
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fdjzhang

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by shaquila at 2011-08-30 08:54:10:
如果你有做对照可以发现，破碎时间足够了，为什么不像对照一样澄清，但是对着光看，发现其实是透光的。因为重组蛋白是包函体，表达量很大，无论怎么破碎，还是不会澄清。你可以把样品进行离心，沉淀是一堆较厚白色 ...

嘿嘿 谢谢回复啊 你说的对照是不加诱导剂的种子液是吗 这个我破过 破了就清了可是如果是包涵体的话 应该是么有活力的 我的有活力 之前我也一直那么做的 现在突然间做不出来了 不知道是菌变异了还是我操作有问题 斜面很长时间么有转接会影响吗 我用20度也诱导过 也还是不行 真的是不知道该怎么办 望指点
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3楼2011-08-30 11:06:03
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jushi0619

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-30 18:42:37
正常你不管有没有表达，只要是菌体破碎了后都会变得澄清些的，颜色会变的。你确定你超声时候超声探头有效插入到菌液中了？我感觉你还是没有有效的破碎菌
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4楼2011-08-30 15:06:26
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fdjzhang

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jushi0619 at 2011-08-30 15:06:26:
正常你不管有没有表达，只要是菌体破碎了后都会变得澄清些的，颜色会变的。你确定你超声时候超声探头有效插入到菌液中了？我感觉你还是没有有效的破碎菌

我确定嘿 现在就是很奇怪 之前都能破出来的 现在条件和以前一样 不知道为啥就做不出来了 纠结啊
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5楼2011-08-30 16:48:18
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bubingwu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 鼓励新虫交流 2011-09-01 07:00:20
我之前也发生过这个情况，我是表达的温度有变化，其他都一样，温度低的超声后澄清，温度高表达的超声后是浑浊。一楼说是包涵体，我觉得不可能吧，是不是温度高的大肠杆菌繁殖的多啊，反正是超声多次还是那样，不知道楼主解决了吗？
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6楼2011-08-31 19:03:20
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fdjzhang

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bubingwu at 2011-08-31 19:03:20:
我之前也发生过这个情况，我是表达的温度有变化，其他都一样，温度低的超声后澄清，温度高表达的超声后是浑浊。一楼说是包涵体，我觉得不可能吧，是不是温度高的大肠杆菌繁殖的多啊，反正是超声多次还是那样，不知 ...

哎 先马虎着做一下
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7楼2011-08-31 21:28:57
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飞雪迷影

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-01 18:53:10
你的三种溶液是不是时间太长了，或者受到过污染，可以尝试重新配置一瓶，离心12000 1分钟试试看，操作时溶液混匀，加溶液2时切勿震荡，冰浴5分钟，试试看
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8楼2011-09-01 10:13:43
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fdjzhang

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 飞雪迷影 at 2011-09-01 10:13:43:
你的三种溶液是不是时间太长了，或者受到过污染，可以尝试重新配置一瓶，离心12000 1分钟试试看，操作时溶液混匀，加溶液2时切勿震荡，冰浴5分钟，试试看

三种溶液？不太明白，可否说得明白点嘿
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9楼2011-09-01 15:19:12
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shine779

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
10楼2014-04-14 16:11:33
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