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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】一个细菌破碎问题
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gylu

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】一个细菌破碎问题 已有8人参与

我们最近在使用超生破碎细菌经常出现细菌不能破碎的现象，换另外的超声破碎仪还是不能解决，请叫各位是什么原因？谢谢！
我们破碎的细菌是大肠杆菌
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要想得到从没有过的东西，就要做从没有做过的事情
1楼 2011-01-24 20:27:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

biowandy

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by gylu at 2011-01-25 11:01:28:



我不知道是不是我的细菌浓度太高，我的是400ml的菌液回收菌体，然后用50ml的缓冲液悬浮的，功率是200w 2s，间隔3s，我试过破碎30分钟，但还是很混浊。谢谢你的建议，我试一下加大功率试试。

400ml的菌液  浓度一点都不高， 按说不会这样啊。你把功率调大到300试试。把时间也调长点。  另外只有细菌浓度稀，破碎很完全的时候，才会得到那种透明的液体， 而大多时候不是完全透明的液体，有点浑，但是绝对不是细菌的那种浑浊。你可以自己感受下。
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5楼2011-01-25 11:11:36
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deblway

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
同楼上。。。大概楼主的蛋白包涵体了。。。如果是包涵体的话。。。破碎一天都不可能破清的。。。而且离心后的沉淀有黑色的碳化产物。。。一般这种情况我是离心好菌了后直接放-80，然后拿出来化掉。。反复冻融。。然后加点溶菌酶后开破，根据菌的量决定破碎时间，然后就纯。。试试低温诱导看看吧，能否减少包涵体的形成。。反正上清越多越好咯。。
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海贼王！哥当定了。。。。
8楼2011-05-23 16:44:36
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普通回帖

su3

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是频率的问题，你的机器符合细胞破碎的要求么？
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2楼2011-01-24 23:46:00
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biowandy

木虫 (正式写手)
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rainwander(金币+1): 呵呵，有意思，鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-25 22:43:13
引用回帖:
Originally posted by gylu at 2011-01-24 20:27:03:
我们最近在使用超生破碎细菌经常出现细菌不能破碎的现象，换另外的超声破碎仪还是不能解决，请叫各位是什么原因？谢谢！
我们破碎的细菌是大肠杆菌

功率多大？   时间多久？你说出来，


这世界上练过铁布衫的细菌到目前为止还没出现。



300w，3s， 间隔4s， 12分钟试试，  当然也要看体积，我说的这是50ml的体积，离心管装
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3楼2011-01-25 10:53:05
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gylu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by biowandy at 2011-01-25 10:53:05:



功率多大？   时间多久？你说出来，


这世界上练过铁布衫的细菌到目前为止还没出现。



300w，3s， 间隔4s， 12分钟试试，  当然也要看体积，我说的这是50ml的体积，离心管装

我不知道是不是我的细菌浓度太高，我的是400ml的菌液回收菌体，然后用50ml的缓冲液悬浮的，功率是200w 2s，间隔3s，我试过破碎30分钟，但还是很混浊。谢谢你的建议，我试一下加大功率试试。
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要想得到从没有过的东西，就要做从没有做过的事情
4楼2011-01-25 11:01:28
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gylu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gylu at 2011-01-25 11:01:28:



我不知道是不是我的细菌浓度太高，我的是400ml的菌液回收菌体，然后用50ml的缓冲液悬浮的，功率是200w 2s，间隔3s，我试过破碎30分钟，但还是很混浊。谢谢你的建议，我试一下加大功率试试。

好的，谢谢！
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要想得到从没有过的东西，就要做从没有做过的事情
6楼2011-01-25 16:26:28
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就爱瞌睡虫

新虫 (初入文坛)
★
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有的时候包涵体表达的时候就很难破的很清亮
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7楼2011-05-23 11:17:03
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lly198784

木虫 (正式写手)
★
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我们实验室一般采取的是超3s停5s，300W的功率，超声时间根据你的浓度决定。
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9楼2011-05-24 15:19:00
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36894256

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
先说你的菌超声指定可以碎的  实在不行用溶菌酶处理吧 买国药的就行 便宜好用
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10楼2011-05-24 17:35:27
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