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欣如止水

金虫 (小有名气)

[求助] 求助革兰氏阳性菌的高效破碎方法已有1人参与

各位虫友,我在实验中遇到一个比较棘手的问题,应用超声破碎法破碎一株革兰氏阳性菌的效果非常差,只有相同条件下(6s,6s,99次, 400w)处理大肠杆菌的三分之一的效果。实验的目的是测定SOD、CAT等酶的酶活,因此既要顾及酶活性,又要追求高破碎效率。有在这方面进行过尝试的虫友帮帮忙。谢谢啊
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wjf008

金虫 (正式写手)


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zhang8826857(金币+1): 鼓励应助 2012-01-04 22:23:55
实验室中如果样品不是太多的话,可以试试研磨的方法。超声的话你可以稍微优化一下,不知道你的超声条件有依据么。
2楼2012-01-04 17:19:52
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

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rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:48:42
加一点溶葡萄球菌素(酶)。
3楼2012-01-04 20:15:21
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dadou1983

木虫 (正式写手)

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rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:48:46
液氮研磨的方法也可以试试。
4楼2012-01-05 09:15:58
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200448506

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:48:51
可以用均质器进行高压破菌,不过样品需要较多
5楼2012-01-05 13:19:17
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kingsoo

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:48:56
先加溶菌酶37度水浴十分钟,再破壁效果会好些,溶菌酶终浓度2mg/ml.
6楼2012-01-06 08:50:02
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fxgowen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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zhang8826857(金币+3): 鼓励 2012-01-06 22:23:26
常用的方法是用溶菌酶水解细胞壁的(适当延长消化时间),溶菌酶可以专一性地作用于肽聚糖分子的N-乙酰胞壁酸(NAM)与乙酰葡萄糖氨(NAG)之间的β-1,4糖苷链使之断裂,使细菌细胞壁变得松驰。。。如果实在很难破壁的话可以试试先用溶菌酶处理1-2h,再超声破碎细胞提取蛋白。
7楼2012-01-06 13:08:00
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孤行客

铜虫 (初入文坛)

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rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:49:02
首选高压匀质机,其次溶菌酶
8楼2012-01-06 22:53:28
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欣如止水

金虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by wjf008 at 2012-01-04 17:19:52:
实验室中如果样品不是太多的话,可以试试研磨的方法。超声的话你可以稍微优化一下,不知道你的超声条件有依据么。

但是研磨不会影响酶活性吗?
9楼2012-01-07 09:00:33
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xmcyouth

铁虫 (初入文坛)

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这种情况只有采用物理方法!用液氮冷冻后迅速放入37摄氏度水中。反复冻融几次!效果很好的!
10楼2012-03-16 15:46:29
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