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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助革兰氏阳性菌的高效破碎方法
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欣如止水

金虫 (小有名气)

[求助] 求助革兰氏阳性菌的高效破碎方法 已有1人参与

各位虫友，我在实验中遇到一个比较棘手的问题，应用超声破碎法破碎一株革兰氏阳性菌的效果非常差，只有相同条件下（6s,6s,99次, 400w）处理大肠杆菌的三分之一的效果。实验的目的是测定SOD、CAT等酶的酶活，因此既要顾及酶活性，又要追求高破碎效率。有在这方面进行过尝试的虫友帮帮忙。谢谢啊
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1楼 2012-01-04 16:06:10
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wjf008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 鼓励应助 2012-01-04 22:23:55
实验室中如果样品不是太多的话，可以试试研磨的方法。超声的话你可以稍微优化一下，不知道你的超声条件有依据么。
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2楼2012-01-04 17:19:52
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qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:48:42
加一点溶葡萄球菌素（酶）。
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3楼2012-01-04 20:15:21
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dadou1983

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:48:46
液氮研磨的方法也可以试试。
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4楼2012-01-05 09:15:58
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200448506

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:48:51
可以用均质器进行高压破菌，不过样品需要较多
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5楼2012-01-05 13:19:17
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kingsoo

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:48:56
先加溶菌酶37度水浴十分钟，再破壁效果会好些，溶菌酶终浓度2mg/ml.
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6楼2012-01-06 08:50:02
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fxgowen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+3): 鼓励 2012-01-06 22:23:26
常用的方法是用溶菌酶水解细胞壁的（适当延长消化时间）,溶菌酶可以专一性地作用于肽聚糖分子的N-乙酰胞壁酸(NAM)与乙酰葡萄糖氨(NAG)之间的β-1,4糖苷链使之断裂，使细菌细胞壁变得松驰。。。如果实在很难破壁的话可以试试先用溶菌酶处理1-2h，再超声破碎细胞提取蛋白。
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7楼2012-01-06 13:08:00
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孤行客

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-07 08:49:02
首选高压匀质机，其次溶菌酶
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8楼2012-01-06 22:53:28
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欣如止水

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by wjf008 at 2012-01-04 17:19:52:
实验室中如果样品不是太多的话，可以试试研磨的方法。超声的话你可以稍微优化一下，不知道你的超声条件有依据么。

但是研磨不会影响酶活性吗？
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9楼2012-01-07 09:00:33
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xmcyouth

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种情况只有采用物理方法！用液氮冷冻后迅速放入37摄氏度水中。反复冻融几次！效果很好的！
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10楼2012-03-16 15:46:29
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