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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 革兰氏阳性菌RNA提取问题
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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)

[求助] 革兰氏阳性菌RNA提取问题

提取革兰氏阳性菌的RNA，前期用溶菌酶（50mg/ml），37度处理1h，但还是没有提取出来，革兰氏阳性菌的细胞壁比较厚，是不是还需要加其他的试剂帮助破壁？要加什么试剂？期望得到各位的帮助，再次非常感谢。
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1楼 2011-11-07 11:17:23
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smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-11-07 18:45:13
细胞破碎可以采用超声破碎仪 啊
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2楼2011-11-07 16:05:39
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sweetbobo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+2): Good 2011-11-07 18:45:49
wanhscn(金币+1): 鼓励回答问题！有奖励！ 2011-11-08 11:35:44
liweiwei0812(金币+1): 2011-11-08 16:31:38
具体是那种革兰氏阳性菌？
50的量还是很高
有一个问题：37度处理1H 时间太长，因为RNA是很容易被RNA酶（无处不在）降解的，
细胞壁被酶解后，释放出胞内物质，包括RNA，此时RNA就被酶降解了，所以即便是后期抽取RNA，也没有用。
我做过金黄色葡萄球菌的RNA抽取，你要是想知道具体的，可以直接看我们实验室的网站sunlab.ustc.edu.cn，来联系我们。
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3楼2011-11-07 16:53:15
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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sweetbobo at 2011-11-07 16:53:15:
具体是那种革兰氏阳性菌？
50的量还是很高
有一个问题：37度处理1H 时间太长，因为RNA是很容易被RNA酶（无处不在）降解的，
细胞壁被酶解后，释放出胞内物质，包括RNA，此时RNA就被酶降解了，所以即便是后期抽 ...

我处理过20min、30min、40min，提取都看不到23S、16S条带，我想应该是细胞壁破裂的不好，我们没有超声波，能不能用液氮研磨或者加表面活性剂后，再用溶菌酶处理呢？
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4楼2011-11-08 10:13:55
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sweetbobo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们用的酶是溶菌酶浓度是10mg/ml,还有另为一种溶葡菌酶浓度0.033mg/ml
处理时间是10分钟以内，裂解效果很好，2ml菌抽出的RNA大概是10微克级别
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5楼2011-11-08 14:28:20
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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sweetbobo at 2011-11-08 14:28:20:
我们用的酶是溶菌酶浓度是10mg/ml,还有另为一种溶葡菌酶浓度0.033mg/ml
处理时间是10分钟以内，裂解效果很好，2ml菌抽出的RNA大概是10微克级别

非常感谢！
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6楼2011-11-08 16:25:52
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