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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)

[求助] 革兰氏阳性菌RNA提取问题

提取革兰氏阳性菌的RNA,前期用溶菌酶(50mg/ml),37度处理1h,但还是没有提取出来,革兰氏阳性菌的细胞壁比较厚,是不是还需要加其他的试剂帮助破壁?要加什么试剂?期望得到各位的帮助,再次非常感谢。
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smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-11-07 18:45:13
细胞破碎可以采用超声破碎仪 啊
2楼2011-11-07 16:05:39
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sweetbobo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+2): Good 2011-11-07 18:45:49
wanhscn(金币+1): 鼓励回答问题!有奖励! 2011-11-08 11:35:44
liweiwei0812(金币+1): 2011-11-08 16:31:38
具体是那种革兰氏阳性菌?
50的量还是很高
有一个问题:37度处理1H 时间太长,因为RNA是很容易被RNA酶(无处不在)降解的,
细胞壁被酶解后,释放出胞内物质,包括RNA,此时RNA就被酶降解了,所以即便是后期抽取RNA,也没有用。
我做过金黄色葡萄球菌的RNA抽取,你要是想知道具体的,可以直接看我们实验室的网站sunlab.ustc.edu.cn,来联系我们。
3楼2011-11-07 16:53:15
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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sweetbobo at 2011-11-07 16:53:15:
具体是那种革兰氏阳性菌?
50的量还是很高
有一个问题:37度处理1H 时间太长,因为RNA是很容易被RNA酶(无处不在)降解的,
细胞壁被酶解后,释放出胞内物质,包括RNA,此时RNA就被酶降解了,所以即便是后期抽 ...

我处理过20min、30min、40min,提取都看不到23S、16S条带,我想应该是细胞壁破裂的不好,我们没有超声波,能不能用液氮研磨或者加表面活性剂后,再用溶菌酶处理呢?
4楼2011-11-08 10:13:55
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sweetbobo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们用的酶是溶菌酶浓度是10mg/ml,还有另为一种溶葡菌酶浓度0.033mg/ml
处理时间是10分钟以内,裂解效果很好,2ml菌抽出的RNA大概是10微克级别
5楼2011-11-08 14:28:20
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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sweetbobo at 2011-11-08 14:28:20:
我们用的酶是溶菌酶浓度是10mg/ml,还有另为一种溶葡菌酶浓度0.033mg/ml
处理时间是10分钟以内,裂解效果很好,2ml菌抽出的RNA大概是10微克级别

非常感谢!
6楼2011-11-08 16:25:52
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