24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 4019  |  回复: 9

84146922

金虫 (小有名气)

[求助] RNA变性电泳PAGE,带有重影 已有1人参与

15%的变性 尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳,样品是总RNA,跑出来的电泳带有重影,使用的条件是1XTBE,60V,电泳5h,使用的marker为非变性的marker,跑不会看是正常的。但是怎么其他目的带也有重影呢?望各位虫指点。
同时也跑了15%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,条件一样,很正常,带分得很开,样品没有问题。

变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳结果:

RNA变性电泳PAGE,带有重影
20140613-RNA-变性PAGE.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

添加样品进入孔道是,样品不能沉淀在泳道的低端,而非变性电泳却没有这种情况
添加样品时,已经冲洗加样孔了,这个什么原因,望虫友帮助,谢谢
2楼2014-07-01 20:44:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
84146922(myprayer代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-07-02 12:17:31
84146922: 金币+17, ★★★★★最佳答案 2014-07-02 19:37:10
初手干这个,这是最常见的问题
urea极易析出,不断的在从胶里面扩散出来,聚集在well里面,loading buffer的密度不如urea高,urea实在是太高了,所以urea-PAGE上样前,注意是刚刚上样前,要用注射器使命的吹孔,把尿素吹出来。同时上样速度要快,因为尿素还在析出,尤其是well两侧的析出,时间长了样品即便上进去是好好的,也会被抬升和压成锥形。
3楼2014-07-02 10:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-07-02 10:14:01
初手干这个,这是最常见的问题
urea极易析出,不断的在从胶里面扩散出来,聚集在well里面,loading buffer的密度不如urea高,urea实在是太高了,所以urea-PAGE上样前,注意是刚刚上样前,要用注射器使命的吹孔,把 ...

换了甲酰胺缓冲液之后,好很多了,谢谢
4楼2014-07-02 19:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 84146922 at 2014-07-02 19:37:47
换了甲酰胺缓冲液之后,好很多了,谢谢...

这是何苦!没见过跑PAGE还用甲酰胺buffer的,没必要,TBE足以胜任,甲酰胺太毒,能少用少用。
5楼2014-07-02 20:44:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-07-02 20:44:56
这是何苦!没见过跑PAGE还用甲酰胺buffer的,没必要,TBE足以胜任,甲酰胺太毒,能少用少用。...

嗯嗯,是使用的TBE,上样品是加了2X的甲酰胺缓冲液,如果使用普通买酶送的10Xloading,吹打进样孔后,带还是有少许锥形,而用了2X的甲酰胺缓冲液,样品就很平
请问,还是什么好办法吗?
另外,有变性电泳的RNA Marker推荐吗?小分子量的,20-30bp...
谢谢
6楼2014-07-03 12:08:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

她小她

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 84146922 at 2014-07-03 12:08:46
嗯嗯,是使用的TBE,上样品是加了2X的甲酰胺缓冲液,如果使用普通买酶送的10Xloading,吹打进样孔后,带还是有少许锥形,而用了2X的甲酰胺缓冲液,样品就很平
请问,还是什么好办法吗?
另外,有变性电泳的RNA M ...

你好,看到你的贴。想请教一些问题。我想用变性聚丙烯酰胺来跑dna差异条带。为什么条带堆积在一起,连marker都分不开呢。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-07-22 07:04:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 她小她 at 2014-07-22 07:04:51
你好,看到你的贴。想请教一些问题。我想用变性聚丙烯酰胺来跑dna差异条带。为什么条带堆积在一起,连marker都分不开呢。
...

你好,请问使用多少电压呢?我是60V,6h。
使用额是2X的甲酰胺Loading Buffer
8楼2014-07-22 09:11:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

她小她

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 84146922 at 2014-07-22 09:11:58
你好,请问使用多少电压呢?我是60V,6h。
使用额是2X的甲酰胺Loading Buffer...

1500。你的marker分开了吗

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-07-22 10:02:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

分开了,很好
10楼2014-07-23 18:54:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 84146922 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +41 xaw. 2026-04-11 42/2100 2026-04-14 20:05 by honglizhao
[考研] 求调剂学校 +11 不会吃肉 2026-04-13 12/600 2026-04-14 19:38 by Art1977
[考研] 复试调剂 +18 积极向上; 2026-04-10 20/1000 2026-04-14 16:11 by zs92450
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +11 池池池池池池 2026-04-08 11/550 2026-04-13 14:10 by 科研论
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-08 9/450 2026-04-12 02:24 by 秋豆菜芽
[考研] 化工调剂求导师收留!一志愿失利,踏实肯干,有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 070300化学279求调剂 +19 哈哈哈^_^ 2026-04-08 20/1000 2026-04-11 20:43 by stoner78
[考研] 296求调剂 +14 汪!?! 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 314求调剂 +18 xhhdjdjsjks 2026-04-09 19/950 2026-04-10 18:53 by HPUCZ
[考研] 301求调剂 +5 149. 2026-04-10 5/250 2026-04-10 15:45 by 柴小白
[考研] 282,电气工程专业,求调剂,不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
信息提示
请填处理意见