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RNA变性电泳PAGE,带有重影已有1人参与
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15%的变性 尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳,样品是总RNA,跑出来的电泳带有重影,使用的条件是1XTBE,60V,电泳5h,使用的marker为非变性的marker,跑不会看是正常的。但是怎么其他目的带也有重影呢?望各位虫指点。 同时也跑了15%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,条件一样,很正常,带分得很开,样品没有问题。 变性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳结果: 20140613-RNA-变性PAGE.jpg |
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2楼2014-07-01 20:44:42
biostar2009
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初手干这个,这是最常见的问题 urea极易析出,不断的在从胶里面扩散出来,聚集在well里面,loading buffer的密度不如urea高,urea实在是太高了,所以urea-PAGE上样前,注意是刚刚上样前,要用注射器使命的吹孔,把尿素吹出来。同时上样速度要快,因为尿素还在析出,尤其是well两侧的析出,时间长了样品即便上进去是好好的,也会被抬升和压成锥形。 |
3楼2014-07-02 10:14:01
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biostar2009
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