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跑电泳的一点小疑问
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跑电泳时点样先加buffer还是DNA样本？ 师兄说最好是把凝胶放在缓冲液里面点样，有什么好处？ 下面是小生酶切DNA后跑电泳的图，先buffer后DNA，从右往左点样的，为什么buffer的带子右边的会比左边的跑的更前呢？还有大神们能看看哪个孔跑的片段更接近300~900bp,还是看不出来？额~  jh 2013-07-03 19 小时 24 分钟_副本.jpg |
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yilunanxia
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【答案】应助回帖
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1949stone: 回帖置顶 2013-07-04 10:37:10
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跑电泳时点样时是先将DNA模板与loading buffer混合再加样。 师兄说最好是把凝胶放在缓冲液里面点样，是因为loading buffer的一个作用是使DNA在液体中沉降到底部。如果不在缓冲溶液里，那loading buffer的沉降作用就无法体现。 我不确定你这些是不是一种样，但是可以肯定的是你的样本都朝着一个方向倾斜，不确定是你的电泳槽的问题还是你把胶放在电泳槽一侧的原因导致的。 至于片段大小无法判断，因为你的marker的各个条带大小都不确定。 |
7楼2013-07-04 10:17:54
cicelyzh
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1949stone
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【答案】应助回帖
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在电泳液加就可以啊 buffer有沉降的作用 @cicelyzh 的意见很中肯 你的mark跑的有点问题 但是起码条带跑开了 分离度也行 但是你的酶切样本 说句难听的 一塌糊涂 没有您所谓片段 需要重新设计下试验 慢慢摸索下 |
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pandashu1988
5楼2013-07-04 09:42:56
6楼2013-07-04 10:05:17
8楼2013-07-04 14:26:28
，这个不是PCR产物，是直接提取总DNA割胶回收后酶切的，因为电泳检测看到有拖带~但是没有割胶回收直接把总DNA酶切的话就能在想要的片段大小那里看到明亮条带。。。所以很纠结，难道是DNA量不够，打算把回收的DNA P一下再来酶切看看 9楼2013-07-04 14:29:56
10楼2013-07-04 14:43:12
