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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)

[求助] 跑电泳的一点小疑问

跑电泳时点样先加buffer还是DNA样本？
师兄说最好是把凝胶放在缓冲液里面点样，有什么好处？

下面是小生酶切DNA后跑电泳的图，先buffer后DNA，从右往左点样的，为什么buffer的带子右边的会比左边的跑的更前呢？还有大神们能看看哪个孔跑的片段更接近300~900bp,还是看不出来？额~
跑电泳的一点小疑问
jh 2013-07-03 19 小时 24 分钟_副本.jpg
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1楼2013-07-03 20:15:08
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-04 10:33:51
1949stone: 回帖置顶 2013-07-04 10:37:10
跑电泳时点样时是先将DNA模板与loading buffer混合再加样。
师兄说最好是把凝胶放在缓冲液里面点样，是因为loading buffer的一个作用是使DNA在液体中沉降到底部。如果不在缓冲溶液里，那loading buffer的沉降作用就无法体现。
我不确定你这些是不是一种样，但是可以肯定的是你的样本都朝着一个方向倾斜，不确定是你的电泳槽的问题还是你把胶放在电泳槽一侧的原因导致的。
至于片段大小无法判断，因为你的marker的各个条带大小都不确定。
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7楼2013-07-04 10:17:54
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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)
用的是2000的MARKER
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2楼2013-07-03 20:16:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 02:57:59
我觉得你的问题很怪，电泳上样buffer和样品是要混合起来的，顺序只是方便操作的问题。一般都是先buffer，可以用一个枪头去吸，然后加入样品，因为枪头上带了样品，不能反复使用造成污染。没有缓冲液的样品孔里是空气，首先这对胶不好，容易干掉。其次，点样时如果在缓冲液里样品可以加在液体里会直接沉到样品孔的底部。所有的凝胶电泳都是这样做的。
至于你的电泳图，我觉得胶做得不行或者电泳条件有问题。marker都跑歪了，而且条带不清晰。
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3楼2013-07-03 23:39:15
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pandashu1988

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 23:39:15
我觉得你的问题很怪，电泳上样buffer和样品是要混合起来的，顺序只是方便操作的问题。一般都是先buffer，可以用一个枪头去吸，然后加入样品，因为枪头上带了样品，不能反复使用造成污染。没有缓冲液的样品孔里是空气 ...

嗯，多谢解答，嘿嘿~我还想问下，泡成这样看不清，是不是DNA总量也不够，切开了也看不清？
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4楼2013-07-04 08:47:02
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