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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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curiekk

捐助贵宾 (著名写手)

[求助] 我的蛋白电泳,样为什么跑不开。

我用的是12%sds分离胶,5%丙烯酰胺的浓缩胶。
上样量依次分别为2.5ul,2.5ul,10ul,10ul
结果如图,中间很粗的条带,分不开。减少上样量,有的细条带又看不到了。

图片1.jpg

[ Last edited by curiekk on 2012-11-30 at 08:24 ]
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
curiekk: 金币+15, ★★★很有帮助 2012-11-30 08:57:57
你2.5ul的样品中,目的蛋白的浓度也有1mg/ml。上10ul肯定是上样量太多了。不知道你想要什么样的纯度或要求?
从这个图上看,你的样品纯度还算可以了。
你可以跑15的分离胶,可以多跑10分钟。
对了,不知道是你照的原因还是胶的原因,怎么发虚啊。
2楼2012-11-30 08:31:34
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curiekk

捐助贵宾 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-30 08:31:34
你2.5ul的样品中,目的蛋白的浓度也有1mg/ml。上10ul肯定是上样量太多了。不知道你想要什么样的纯度或要求?
从这个图上看,你的样品纯度还算可以了。
你可以跑15的分离胶,可以多跑10分钟。
对了,不知道是你照 ...

分离的是菌体表面蛋白,希望得到的条带越多,越分散,越好。
图片是我照的虚。
如果增加胶的浓度,延长跑焦时间,上样浓度是否还需要减少。
坚持
3楼2012-11-30 08:49:05
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

从电泳图上看,那么多蛋白中,其中上面那个大分子蛋白表达量较高,你减少上样量,其中表达量少的蛋白就看不到,增加上样量,但那个表达量高的蛋白则浓度太高,影响其附近条带的效果,这个还是不好办。
建议你使用银染,反正你的蛋白是菌体蛋白,也没有糖基化,但上样量也不能太高,否则那个表达量高的蛋白在银染后会发白。
银染可以看到很多条带,且效果非常明显。
4楼2012-11-30 15:13:17
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