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curiekk

捐助贵宾 (著名写手)

[求助] 我的蛋白电泳，样为什么跑不开。

我用的是12%sds分离胶，5%丙烯酰胺的浓缩胶。
上样量依次分别为2.5ul，2.5ul，10ul，10ul
结果如图，中间很粗的条带，分不开。减少上样量，有的细条带又看不到了。

图片1.jpg

[ Last edited by curiekk on 2012-11-30 at 08:24 ]
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坚持
1楼2012-11-30 08:18:38
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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curiekk: 金币+15, ★★★很有帮助 2012-11-30 08:57:57
你2.5ul的样品中，目的蛋白的浓度也有1mg/ml。上10ul肯定是上样量太多了。不知道你想要什么样的纯度或要求？
从这个图上看，你的样品纯度还算可以了。
你可以跑15的分离胶，可以多跑10分钟。
对了，不知道是你照的原因还是胶的原因，怎么发虚啊。
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2楼2012-11-30 08:31:34
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curiekk

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-30 08:31:34
你2.5ul的样品中，目的蛋白的浓度也有1mg/ml。上10ul肯定是上样量太多了。不知道你想要什么样的纯度或要求？
从这个图上看，你的样品纯度还算可以了。
你可以跑15的分离胶，可以多跑10分钟。
对了，不知道是你照 ...

分离的是菌体表面蛋白，希望得到的条带越多，越分散，越好。
图片是我照的虚。
如果增加胶的浓度，延长跑焦时间，上样浓度是否还需要减少。
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坚持
3楼2012-11-30 08:49:05
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)
从电泳图上看，那么多蛋白中，其中上面那个大分子蛋白表达量较高，你减少上样量，其中表达量少的蛋白就看不到，增加上样量，但那个表达量高的蛋白则浓度太高，影响其附近条带的效果，这个还是不好办。
建议你使用银染，反正你的蛋白是菌体蛋白，也没有糖基化，但上样量也不能太高，否则那个表达量高的蛋白在银染后会发白。
银染可以看到很多条带，且效果非常明显。
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4楼2012-11-30 15:13:17
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