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殷灿灿

新虫 (小有名气)

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[交流] 蛋白质电泳活性？

利用电泳法测蛋白质的组成及含量，跑电泳时需要保证蛋白质的活性吗

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1楼 2012-04-27 20:54:48

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qiaqia832

铜虫 (正式写手)

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★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
树树8013: 回帖置顶 2012-04-29 12:04:57

我只做过变性的SDS-PAGE电泳，那个可以通过软件分析得到蛋白质或者多肽分子的分子质量，不知道你要算什么含量，用考马斯测蛋白含量不行吗？蛋白质的组成不应该那电泳测吧，得用氨基酸分析吧

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12楼2012-04-28 08:25:36

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dodogougou

铁杆木虫 (正式写手)

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树树8013: 回帖置顶 2012-04-29 12:05:18
树树8013: 金币+2, 谢谢耐心交流，欢迎常关注食品板块。 2012-04-29 12:05:50

不需要，也不容易保证蛋白质的活性。保证蛋白质的活性要保证蛋白质有正确的二级结构，高温、变性剂等因素很容易破坏蛋白质的二级结构，电泳放热容易使局部温度过高。更何况通常会故意让蛋白质变性，例如SDS-PAGE。

SDS-PAGE分离蛋白质要用SDS处理，使蛋白质形成带大量负电荷的长棒状分子，还原法SDS-PAGE还要用二硫苏糖醇（DTT）之类的还原剂把二硫键还原成巯基。这样做的目的是使蛋白质在电泳中按照分子量大小分离开，而不必考虑蛋白质原有的构型。如果是组成比较简单的蛋白质样品，与样品在同一张胶上同时跑一组蛋白质分子量标准，然后对电泳后的凝胶进行考马斯亮蓝染色，用分析软件分析条带浓度就可以了，但只是知道某种蛋白质含量的相对情况，不是准确定量。如果是组成比较复杂的蛋白质样品，可能还要转膜进行Western-Blotting，甚至有的会需要进行双向电泳。步骤中很多变性因素的。