24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2391  |  回复: 11

落满夏天

银虫 (正式写手)

[求助] 了解蛋白质性质及其熟悉电泳的高手请进!

小弟做一种蛋白的电泳时,遇到一个问题,在主条带的下面有两条杂带,但是同一样品做分子筛液相分析就没有,因此我判断是降解条带,该蛋白分子量大概是20000多点,等电点大概是11。降解带分子量在一万五左右,有时候有两条,我们用的是变性SDS-Page ,蛋白缓冲液是PH 为7.0的Pb 。不知道是什么原因降解,处理的时候是加处理液100度水浴。不知道大家有没有解决蛋白电泳降解的经验,小弟感激不尽了。蛋白纯化时,离子交换和分子筛都是过的。
回复此楼
星星之火,可以燎原
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流! 2012-01-09 19:59:24
落满夏天(金币+1): 2012-01-11 16:33:24
可能蛋白质样品 是多聚体。靠二硫键结合,在SDS作用下会变性成单聚体。如抗体在SDS PAGE 中就有两条带。
2楼2012-01-09 18:49:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
落满夏天(金币+2): 2012-01-11 16:33:12
分子筛液相的灵敏度没有电泳高,你要是做反相,也许比电泳纯度还低。
蛋白破坏应该是样品缓冲液中的巯基物和sds,我觉得你是纯化的问题,应该是样品不纯。
你可以去除样品缓冲液和电泳缓冲液中的巯基物和sds,跑个电泳看看。
3楼2012-01-10 12:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.会不会是Marker 在上完样 加缓冲液的时候 溢到相邻的样品槽里
2.沸水加热处理样品没有什么错误,你是怎么确定他会出现降解的可能啊
4楼2012-01-10 16:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我只知道SDS-PAGE是变性电泳,跑出来的都是亚基,同一样品做分子筛液相分析应该不是变性的吧,建议做活性电泳,可能就是一个蛋白了
毕业回望科研路,满目疮痍一身土
5楼2012-01-11 10:09:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaohaizi0220

木虫 (正式写手)

基础研发之沉默

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先做一个非变性胶跑一下电泳看看。
有限的我却思考无限的存在
6楼2012-01-11 11:13:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落满夏天

银虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by kaobo2012 at 2012-01-09 18:49:51:
可能蛋白质样品 是多聚体。靠二硫键结合,在SDS作用下会变性成单聚体。如抗体在SDS PAGE 中就有两条带。

这个蛋白结构已经知道不存在二硫键,紫外扫描也超零点几个纳米,活性也一直不好。
星星之火,可以燎原
7楼2012-01-11 16:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落满夏天

银虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by lzgxgz at 2012-01-10 12:49:12:
分子筛液相的灵敏度没有电泳高,你要是做反相,也许比电泳纯度还低。
蛋白破坏应该是样品缓冲液中的巯基物和sds,我觉得你是纯化的问题,应该是样品不纯。
你可以去除样品缓冲液和电泳缓冲液中的巯基物和sds,跑 ...

样品缓冲液已经是最后的原液,应该没有巯基物了,sds我在考虑,是不是破坏了蛋白结构,原液里没有,电泳缓冲液和处理液是有的。另外该蛋白没有二硫键,活性一直不好,也还在找问题。先谢谢了。
星星之火,可以燎原
8楼2012-01-11 16:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落满夏天

银虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by lxh502976898 at 2012-01-10 16:36:19:
1.会不会是Marker 在上完样 加缓冲液的时候 溢到相邻的样品槽里
2.沸水加热处理样品没有什么错误,你是怎么确定他会出现降解的可能啊

一的可能性没有,降解的话我是通过液相分子筛确定的,因为电泳上条带分的很远,在分子筛上这种情况一定可以分开,另外我关注电泳已经有一段时间了。应该是降解无疑,只是不知道原因何在,也许是因为有的键键能太低。还在研究中。
星星之火,可以燎原
9楼2012-01-11 16:36:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落满夏天

银虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by qiyaocheng at 2012-01-11 10:09:38:
我只知道SDS-PAGE是变性电泳,跑出来的都是亚基,同一样品做分子筛液相分析应该不是变性的吧,建议做活性电泳,可能就是一个蛋白了

我在考虑是不是因为sds的关系,因为其他条件不变,不水浴加热的话也是有降解调带的,做活性电泳的话是不是去掉电极液和处理液中的sds。该蛋白紫外扫描超零点几个纳米,活性也一直不好,不知道是不是不稳定的关系。如果您对蛋白活性有研究请指教.
星星之火,可以燎原
10楼2012-01-11 16:44:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 落满夏天 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 化学 307 +12 73372112 2026-04-09 13/650 2026-04-10 08:41 by 探123
[考研] 求调剂 +7 翩翩一书生 2026-04-09 7/350 2026-04-10 07:27 by bljnqdcc
[考研] 22408调剂求助 +3 毂12 2026-04-09 5/250 2026-04-09 23:21 by zhouyuwinner
[考研] 085404,285分求调剂 +12 薇薇考研 2026-04-07 14/700 2026-04-09 23:10 by parmtree
[考研] 297求调剂 +22 ljy20040718! 2026-04-03 24/1200 2026-04-09 20:48 by yanenwang
[考研] 调剂 +8 只叙离别辞 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:25 by zl8213662
[考研] 26考研调剂0710 0860 +10 补补不补 2026-04-03 15/750 2026-04-09 11:13 by ditto77778
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +3 慕绝cc 2026-04-09 3/150 2026-04-09 09:57 by liuhuiying09
[考研] 一志愿西南大学生物学学硕344 求生物学相关调剂/生物与医药 +7 超人不会飞@ 2026-04-08 7/350 2026-04-09 09:35 by gong120082
[考研] 求调剂 +13 柒luck 2026-04-07 13/650 2026-04-08 22:46 by 猪会飞
[考研] 302分求调剂 +4 凡语祈愿 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:03 by 土木硕士招生
[考研] 298求调剂 +4 manman511 2026-04-05 4/200 2026-04-08 16:50 by tjzhao
[考研] 生物医药调剂|SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 334分控制工程求调剂 +4 姜尚真sadasd 2026-04-03 4/200 2026-04-07 09:26 by 蓝云思雨
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:24 by 544594351
[考研] 321求调剂 +6 认真求上学 2026-04-03 6/300 2026-04-04 19:51 by dongzh2009
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
信息提示
请填处理意见