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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我现在想做蛋白质电泳，不知从何下手
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renruntan

禁虫 (著名写手)
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1楼 2011-06-14 14:05:49
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jsk10

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10): 处女帖，欢迎常来生物科学版 2011-06-14 18:24:58
楼主最好先找本蛋白质电泳书看看，一般图书馆都有，蛋白质电泳知识挺多的，一句两句说不清楚，根据你的目的和要求不同选用不同的电泳方式，根据楼主说的蛋白质情况，最常用SDS-PAGE，根据分子量大小分离。
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互相帮助！
5楼2011-06-14 17:58:51
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普通回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

renruntan(金币+1): 2011-06-14 16:35:47
问题是做了电泳了然后做什么 ？
做电泳的目的是什么？
你这几个蛋白 是不是已经分离成单个蛋白了？还是说是混合的？
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2楼2011-06-14 16:29:25
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renruntan

禁虫 (著名写手)
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3楼2011-06-14 16:35:39
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目的是分开？
最终的目的是什么 ？要说明什么问题，还是得到什么结果？是想把他们三个电泳分开，然后纯化回收？还是说，只要证明这个混合物里面有这三个东西？
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4楼2011-06-14 17:27:01
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烂铁

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白电泳的目的是检测在目标位置有没有你的蛋白，或者大致估测你的蛋白大小。而不是从蛋白混合物中分离蛋白。例如我们进行蛋白电泳就是为了检测我的重组质粒在大肠杆菌是否成功表达。
个人建议，你既然有了这几个蛋白的纯品了，其实都可以直接去测序了，跑电泳没有意义。
对于具体的操作，仪器以及药品太复杂，你去网上搜一下就知道了。
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看见你开心我会不禁微笑，想起你伤心我会暗暗心疼。
6楼2011-06-17 10:45:50
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先要大致知道这几种蛋白的分子量，然后根据分子量选择胶的浓度，一般用垂直板 SDS-PAGE电泳即可，
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其实，猪也有理想
7楼2011-06-17 18:34:11
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renruntan

禁虫 (著名写手)
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8楼2011-06-17 21:13:52
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王庭

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by renruntan at 2011-06-17 21:13:52:
恩 ，谢谢，如果分子量差别区间比较大呢，胶浓度的选择，是不是有两种胶，分离胶，固定胶什么的

SDS-PAGE的话，是包括两种胶，浓缩胶和分离胶，不过这两种胶是要同时用的。先浓缩，后分离胶。详细，你可以查些资料。其实百度里面就可以下到类似的PPT的。这样回答希望对你有帮助~
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努力做最好的自己！！
9楼2011-06-17 21:46:22
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nayitian_nan

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

renruntan(金币+2): 2011-06-18 09:23:08
引用回帖:
Originally posted by renruntan at 2011-06-17 21:13:52:
恩 ，谢谢，如果分子量差别区间比较大呢，胶浓度的选择，是不是有两种胶，分离胶，固定胶什么的

有浓缩胶和分离胶，分离胶的浓度选择依据是蛋白质分子量大小，一般12%的分离胶就行，但如果分子量在14.4kd左右，就要考虑换分离胶了，浓缩胶一般5%，我现在用15%分离胶，电压的调节这个不固定，网上可以查，主要是仪器和药品的配置，mark的购买，
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其实，猪也有理想
10楼2011-06-18 09:05:27
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