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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳液问题
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临风7071

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白电泳液问题

最近在跑蛋白的非变性电泳，发现溴酚蓝到底了，我的蛋白还在上样孔附近，我的是80V 2h参照别人的文献的，仔细回想，发现是我的电泳液里面的跟外面的相连了，我用的是伯乐的那种夹心式的电泳槽，夹板内的电泳液和外面的电泳液相连，是不是会导致蛋白跑不下去啊？一直怀疑是这个原因？那位大侠还遇到过这样的情况的？给我解释解释！！
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1楼2011-09-06 13:57:46
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-09-06 21:21:38
引用回帖:
1楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-09-06 13:57:46:
最近在跑蛋白的非变性电泳，发现溴酚蓝到底了，我的蛋白还在上样孔附近，我的是80V 2h参照别人的文献的，仔细回想，发现是我的电泳液里面的跟外面的相连了，我用的是伯乐的那种夹心式的电泳槽，夹板内的电泳液和外 ...

发现溴酚蓝到底了，我的蛋白还在上样孔附近，

你怎么确定在加样孔附近的东西是 你的蛋白
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2楼2011-09-06 18:24:15
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longyh6411

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-09-06 21:21:45
我们实验室也用的伯乐的电泳仪，夹心内的电泳液不能与外面的电泳液相连也，电泳槽上面不是外面电泳液用多少的标志呀，你加到位置就行了，还有你的蛋白质是不是比较大呀,太大的话，loadingbuffer跑完了，蛋白质还在样空附近，你再检查一下哈，祝好运.
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3楼2011-09-06 18:50:06
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临风7071

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2011-09-06 18:24:15:
发现溴酚蓝到底了，我的蛋白还在上样孔附近，

你怎么确定在加样孔附近的东西是 你的蛋白

染色就一条带啊，那还不是我的蛋白还是什么啊
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4楼2011-09-06 18:59:47
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cao534

银虫 (正式写手)
电压是不是可以调高一点，
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5楼2011-09-06 19:11:32
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breezy02008

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by longyh6411 at 2011-09-06 18:50:06:
我们实验室也用的伯乐的电泳仪，夹心内的电泳液不能与外面的电泳液相连也，电泳槽上面不是外面电泳液用多少的标志呀，你加到位置就行了，还有你的蛋白质是不是比较大呀,太大的话，loadingbuffer跑完了，蛋白质还在 ...

夹心内的电泳液不能与外面的电泳液相连.
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6楼2011-09-07 15:57:58
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小兵pp

银虫 (小有名气)
.....你再跑一次不就得了
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7楼2011-09-07 17:14:36
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临风7071

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by longyh6411 at 2011-09-06 18:50:06:
我们实验室也用的伯乐的电泳仪，夹心内的电泳液不能与外面的电泳液相连也，电泳槽上面不是外面电泳液用多少的标志呀，你加到位置就行了，还有你的蛋白质是不是比较大呀,太大的话，loadingbuffer跑完了，蛋白质还在 ...

蛋白140KD左右，是不是很大啊？
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8楼2011-09-07 17:45:25
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longyh6411

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-09-07 17:45:25:
蛋白140KD左右，是不是很大啊？

不大丫。。。我跑过250KD一上的，胶的浓度适当调低点就行了，最好还是跑大胶
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9楼2011-09-08 00:13:29
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allegory

禁虫 (著名写手)

琅琊

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3, BioEPI+1): 谢谢参与 2011-09-17 11:30:15
我也用伯乐的，电压不是问题，从60V到120V我都跑过，效果一样，无非是时间长短不同。有的时候同时做好几个实验我就用60V跑。最好用预染的Marker，你不用管最前沿溴酚蓝的位置，而是以marker为准。你可以试试，祝你顺利拿到中意的图片。
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湛然空寂，圆明不动。
10楼2011-09-08 07:50:25
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