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爱mm

木虫 (著名写手)

[求助] 电泳 蛋白 DNA

请教大家一个问题，蛋白（37KD）与一条标记羧基的DNA单链（58nt）通过氨基羧基结合，想通过电泳检测是否结合上了。
1、能不能用琼脂糖电泳检测呢？
2、如果不行，为什么，有没有相关的资料可以借鉴？
    先谢谢大家了！
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木虫给力！
1楼 2011-06-23 21:38:53
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qjy_134

铜虫 (小有名气)
不能，蛋白跑不进去的
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2楼2011-06-30 09:52:07
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xiejb2005

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

爱mm(金币+2): 谢谢应助 2011-06-30 19:28:03


琼脂糖电泳蛋白进不去

直接用SDS-PAGE应该可以吧 ，当然如果不想变性的话，也有天然蛋白的电泳就不加sds,其他的差不多注意下蛋白酸溅性，这种电泳可以百读上找具体方法的
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3楼2011-06-30 09:58:40
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xiejb2005

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

爱mm(金币+2): 谢谢回帖 2011-06-30 19:32:08
蛋白质和dna的单链我是确定都可以用这个天然电泳的Native-PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)



琼脂糖电泳只针对dna 双链 ，单恋不能用，进不去
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4楼2011-06-30 10:01:58
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xiejb2005

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

爱mm(金币+4): 谢谢，您的回答很详细。 2011-06-30 19:38:13
Native-PAGE原理


非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下，对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于同工酶的鉴定和提纯。未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状和电荷，它们的分离是依据其电泳迁移率的不同和凝胶的分子筛作用，因而可以得到较高的分辨率，尤其是在电泳分离后仍能保持蛋白质和酶等生物大分子的生物活性，对于生物大分子的鉴定有重要意义，其方法是在凝胶上进行两份相同样品的电泳，电泳后将凝胶切成两半，一半用于活性染色，对某个特定的生物大分子进行鉴定，另一半用于所有样品的染色，以分析样品中各种生物大分子的种类和含量。

Native-PAGE实验方法

　　非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性sds-page电泳在操作上基本上是相同的，只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。
    一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳2 @! `8 w* I, ]
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5楼2011-06-30 10:03:03
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爱mm

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by xiejb2005 at 2011-06-30 09:58:40:


琼脂糖电泳蛋白进不去

直接用SDS-PAGE应该可以吧 ，当然如果不想变性的话，也有天然蛋白的电泳就不加sds,其他的差不多注意下蛋白酸溅性，这种电泳可以百读上找具体方法的

谢谢您的回复，不过，请问为什么蛋白跑不进去呢，琼脂糖的孔径不是比PAGE的孔径大吗？
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木虫给力！
6楼2011-06-30 19:29:09
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爱mm

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by xiejb2005 at 2011-06-30 10:01:58:
蛋白质和dna的单链我是确定都可以用这个天然电泳的Native-PAGE(非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)



琼脂糖电泳只针对dna 双链 ，单恋不能用，进不去

为什么琼脂糖电泳单链也不能跑呢？
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木虫给力！
7楼2011-06-30 19:32:57
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芯片妞妞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1521079楼: Originally posted by 爱mm at 2011-06-23 21:38:53
请教大家一个问题，蛋白（37KD）与一条标记羧基的DNA单链（58nt）通过氨基羧基结合，想通过电泳检测是否结合上了。
1、能不能用琼脂糖电泳检测呢？
2、如果不行，为什么，有没有相关的资料可以借鉴？
    先谢谢 ...

请问楼主，最终跑的什么电泳？得到你想要的记过了吗？我想借鉴一下
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8楼2012-07-05 21:55:33
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爱mm

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2420189楼: Originally posted by 芯片妞妞 at 2012-07-05 21:55:33
请问楼主，最终跑的什么电泳？得到你想要的记过了吗？我想借鉴一下...

我最后没有跑电泳，因为我前面蛋白与羧基连接的步骤放弃了，所以最后也就没有跑电泳。
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木虫给力！
9楼2012-07-06 15:05:46
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