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birdlivy

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教一个DNA电泳的问题 已有13人参与

我有段DNA想跑凝胶电泳，但是由于只有20几个碱基，所以查了一下文献看到必须要用非变性聚丙烯酰胺凝胶才能分离开。
但是因为没有做过，不知道哪位高手有经验可以指导一下呢？
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1楼 2010-05-04 15:42:43
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cyjwx123

铁虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1): 2010-05-04 20:46:27
birdlivy(金币+4):O(∩_∩)O谢谢 2010-05-13 10:56:47
琼脂糖凝胶电泳嘛，胶的浓度估计在4%吧，应该可以分离
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看的开才是真本事~
2楼2010-05-04 15:53:29
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3):鼓励交流 2010-05-04 20:46:39
birdlivy(金币+4):O(∩_∩)O谢谢 2010-05-13 10:57:03
首先，我要问你，你的20bp的是什么产物？是单链退货的？如果是，那浓度应该很高，琼脂糖胶是能看得出来的，即使不到4%，也可以，不然的话，我推荐你跑丙烯酰胺胶，也不难，也可以切胶回收，希望对你有帮助～
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3楼2010-05-04 16:33:06
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主
★ ★
lstt09nk(金币+2):热心虫友，感谢交流~~ 2010-05-04 18:31:03
什么叫分辨率？ 首先当然是分辨不同的物质了，如果你只有一条带，谈分辨率是没有意义的

所以要看的不是你的条带有多大，而是你要分离的条带直接都多大差别，page胶是用来提高分辨率的

如果你是一条带，跑琼脂糖就可以，不管是20bp还是20kb
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4楼2010-05-04 16:38:49
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birdlivy

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cyjwx123 at 2010-05-04 17:23:29:
琼脂糖凝胶电泳嘛，胶的浓度估计在4%吧，应该可以分离

但是我看到文献上基本都是用的聚丙烯酰胺凝胶来分离的
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5楼2010-05-04 19:28:23
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birdlivy

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-05-04 18:03:06:
首先，我要问你，你的20bp的是什么产物？是单链退货的？如果是，那浓度应该很高，琼脂糖胶是能看得出来的，即使不到4%，也可以，不然的话，我推荐你跑丙烯酰胺胶，也不难，也可以切胶回收，希望对你有帮助～:tige ...

我们做的不是纯生物的东西，20bp的DNA合成公司买回来的哈！我先用琼脂糖跑一下看看能看到不，谢谢！
本来看文献是跑丙烯酰胺胶，但是因为没有跑过，不知道是用跑蛋白的垂直电泳槽，还是仍然用跑DNA的水平槽，只是换一下胶的成分，其他都和跑普通的DNA一样吗？
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6楼2010-05-04 19:35:08
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ziyunpy

新虫 (小有名气)
用聚丙烯凝胶跑
琼脂糖分离不出来
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努力不等以成功
7楼2010-05-04 22:19:11
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
birdlivy(金币+4):O(∩_∩)O谢谢 2010-05-13 10:57:31
——

呵呵，简单：打个质谱就完事了，还可以检测出合成的对错。
如果是考虑到合成的正确性，那么要求合成公司提供质谱分析报告吧，提供点银两他们就会做的很好！
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8楼2010-05-05 02:09:59
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独舟

新虫 (初入文坛)
我和楼主有同样的问题。。。不过我的DNA更小，是10bp的。楼主跑完后可否告知结果呢？先谢过！！！
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9楼2010-05-05 11:54:52
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快乐由自己go

银虫 (小有名气)
birdlivy(金币+4):O(∩_∩)O谢谢 2010-05-13 10:57:22
如果待电泳的DNA是单一大小的样品的话，个人觉得用浓度较高的琼脂糖凝胶较低电压下电泳较短时间应该可以看到有没有条带。
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10楼2010-05-05 16:17:15
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