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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做SRAP标记的进来，DNA聚丙烯酰胺电泳，预电泳问题。。。
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墨池

银虫 (小有名气)

[求助] 做SRAP标记的进来，DNA聚丙烯酰胺电泳，预电泳问题。。。

DNA，SRAP标记，6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 的预电泳问题：
1  预电泳电压，时间？
2  预电泳好处？
3 为什么同一块胶，两侧的泳道跑的慢，中间跑的快。我们的电泳槽没冷却装置，普通型号的。DYCZ-21型号。



谢谢哈哈
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
1楼 2011-07-22 14:46:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-22 19:16:38
楼主最近提问很多啊，呵呵~

没有冷却装置很正常，一般都拿冰块去降温：拿个大盘子，先铺一层冰，然后放上电泳槽，最后再用尽可能多的冰块把电泳槽埋起来，当然，别盖过顶，不然冰融了水会流进去。隔段时间检查下，冰融了再换新的。
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2楼2011-07-22 16:59:20
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jyongchao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

墨池(金币+1): 2011-07-23 13:02:35
同一块胶中间快两侧慢，也有可能是胶的底部两侧有气泡
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10楼2011-07-23 02:00:27
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by changes at 2011-07-23 11:27:17:
建议老板买专门的测序电泳系统，国产的我们用DYCZ-20C 和DYCZ-20C 两种DNA序列分析电泳仪，你提到的DYCZ-21属于多功能的电泳系统，做SREP多态性分析效果会差些。当然了你如果充分掌握了仪器的使用或实验室有前人 ...

跑SRAP标记还需要用测序胶，简直就是拿大炮打蚊子！

一，5个螺丝要拧平衡，中间的那个不要太紧
二，电压不要超过200，150最好
三，刚凝固要过半个小时后再点
四，最边上的孔不要点
五，没有必要用冰什么的。
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真相是最大的奢侈品
21楼2011-12-03 09:01:57
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普通回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
其他问题不懂啊，不要问我--！
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3楼2011-07-22 17:00:59
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

墨池(金币+2): 2011-07-22 20:27:02
引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 14:46:11:
DNA，SRAP标记，6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 的预电泳问题：
1  预电泳电压，时间？
2  预电泳好处？
3 为什么同一块胶，两侧的泳道跑的慢，中间跑的快。我们的电泳槽没冷却装置，普通型号的。DYCZ-21型号。
...

前两个问题：对于预电泳，有一种解释是为了除去没有聚合完全的丙烯酰胺分子和交联剂，其实最直接的理解就是预电泳会让胶跑的好看一点......预电泳的时间控制在30min左右，电压根据胶的长度来，印象里好像是5~10V/cm，反正100V以下都差不多了，影响不大。
第三个问题：条带弯曲的话，一种原因就是由于没有冷却装置，中间部分温度较高，所以跑的比较快一点。还一种原因是电泳槽的密封性能有问题，某处可能“漏电”了。
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4楼2011-07-22 17:48:00
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墨池

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-07-22 17:48:00:
前两个问题：对于预电泳，有一种解释是为了除去没有聚合完全的丙烯酰胺分子和交联剂，其实最直接的理解就是预电泳会让胶跑的好看一点......预电泳的时间控制在30min左右，电压根据胶的长度来，印象里好像是5~1 ...

受用(*^__^*) 嘻嘻……
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
5楼2011-07-22 20:27:12
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墨池

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-22 16:59:20:
楼主最近提问很多啊，呵呵~

没有冷却装置很正常，一般都拿冰块去降温：拿个大盘子，先铺一层冰，然后放上电泳槽，最后再用尽可能多的冰块把电泳槽埋起来，当然，别盖过顶，不然冰融了水会流进去。隔段时间检查 ...

发现你想当的耐烦呀，搁我，早撒丫子跑回家了，还弄什么冰呀，哈哈，光做个电泳都够受的啦
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
6楼2011-07-22 20:29:17
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墨池

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-07-22 17:48:00:
前两个问题：对于预电泳，有一种解释是为了除去没有聚合完全的丙烯酰胺分子和交联剂，其实最直接的理解就是预电泳会让胶跑的好看一点......预电泳的时间控制在30min左右，电压根据胶的长度来，印象里好像是5~1 ...

没有冷却装置，有什么方法可以替代，求教...
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阳光暖暖的，心情暖暖的，努力做个精致的女人！
7楼2011-07-22 20:49:53
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 20:29:17:
发现你想当的耐烦呀，搁我，早撒丫子跑回家了，还弄什么冰呀，哈哈，光做个电泳都够受的啦

还好吧，一大盘冰块能撑半天的……
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8楼2011-07-22 20:53:57
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gwbk

木虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-23 17:17:03
冰浴确实是简单易行的方法。如果可以把整套电泳设备搬到层析柜里面也行~
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9楼2011-07-22 22:50:31
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