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墨池

银虫 (小有名气)

[求助] 做SRAP标记的进来,DNA聚丙烯酰胺电泳,预电泳问题。。。

DNA,SRAP标记,6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 的预电泳问题:
1  预电泳电压,时间?
2  预电泳好处?
3 为什么同一块胶,两侧的泳道跑的慢,中间跑的快。我们的电泳槽没冷却装置,普通型号的。DYCZ-21型号。



谢谢哈哈
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-22 19:16:38
楼主最近提问很多啊,呵呵~

没有冷却装置很正常,一般都拿冰块去降温:拿个大盘子,先铺一层冰,然后放上电泳槽,最后再用尽可能多的冰块把电泳槽埋起来,当然,别盖过顶,不然冰融了水会流进去。隔段时间检查下,冰融了再换新的。
2楼2011-07-22 16:59:20
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jyongchao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

墨池(金币+1): 2011-07-23 13:02:35
同一块胶中间快两侧慢,也有可能是胶的底部两侧有气泡
10楼2011-07-23 02:00:27
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by changes at 2011-07-23 11:27:17:
建议老板买专门的测序电泳系统,国产的我们用DYCZ-20C 和DYCZ-20C 两种DNA序列分析电泳仪,你提到的DYCZ-21属于多功能的电泳系统,做SREP多态性分析效果会差些。当然了你如果充分掌握了仪器的使用或实验室有前人 ...

跑SRAP标记还需要用测序胶,简直就是拿大炮打蚊子!

一,5个螺丝要拧平衡,中间的那个不要太紧
二,电压不要超过200,150最好
三,刚凝固要过半个小时后再点
四,最边上的孔不要点
五,没有必要用冰什么的。
真相是最大的奢侈品
21楼2011-12-03 09:01:57
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普通回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

其他问题不懂啊,不要问我--!
3楼2011-07-22 17:00:59
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

墨池(金币+2): 2011-07-22 20:27:02
引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 14:46:11:
DNA,SRAP标记,6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 的预电泳问题:
1  预电泳电压,时间?
2  预电泳好处?
3 为什么同一块胶,两侧的泳道跑的慢,中间跑的快。我们的电泳槽没冷却装置,普通型号的。DYCZ-21型号。
...

前两个问题:对于预电泳,有一种解释是为了除去没有聚合完全的丙烯酰胺分子和交联剂,其实最直接的理解就是预电泳会让胶跑的好看一点......预电泳的时间控制在30min左右,电压根据胶的长度来,印象里好像是5~10V/cm,反正100V以下都差不多了,影响不大。
第三个问题:条带弯曲的话,一种原因就是由于没有冷却装置,中间部分温度较高,所以跑的比较快一点。还一种原因是电泳槽的密封性能有问题,某处可能“漏电”了。
4楼2011-07-22 17:48:00
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墨池

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-07-22 17:48:00:
前两个问题:对于预电泳,有一种解释是为了除去没有聚合完全的丙烯酰胺分子和交联剂,其实最直接的理解就是预电泳会让胶跑的好看一点......预电泳的时间控制在30min左右,电压根据胶的长度来,印象里好像是5~1 ...

受用(*^__^*) 嘻嘻……
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5楼2011-07-22 20:27:12
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墨池

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-07-22 16:59:20:
楼主最近提问很多啊,呵呵~

没有冷却装置很正常,一般都拿冰块去降温:拿个大盘子,先铺一层冰,然后放上电泳槽,最后再用尽可能多的冰块把电泳槽埋起来,当然,别盖过顶,不然冰融了水会流进去。隔段时间检查 ...

发现你想当的耐烦呀,搁我,早撒丫子跑回家了,还弄什么冰呀,哈哈,光做个电泳都够受的啦
阳光暖暖的,心情暖暖的,努力做个精致的女人!
6楼2011-07-22 20:29:17
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墨池

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-07-22 17:48:00:
前两个问题:对于预电泳,有一种解释是为了除去没有聚合完全的丙烯酰胺分子和交联剂,其实最直接的理解就是预电泳会让胶跑的好看一点......预电泳的时间控制在30min左右,电压根据胶的长度来,印象里好像是5~1 ...

没有冷却装置,有什么方法可以替代,求教...
阳光暖暖的,心情暖暖的,努力做个精致的女人!
7楼2011-07-22 20:49:53
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 20:29:17:
发现你想当的耐烦呀,搁我,早撒丫子跑回家了,还弄什么冰呀,哈哈,光做个电泳都够受的啦

还好吧,一大盘冰块能撑半天的……
8楼2011-07-22 20:53:57
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gwbk

木虫 (正式写手)

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-23 17:17:03
冰浴确实是简单易行的方法。如果可以把整套电泳设备搬到层析柜里面也行~
9楼2011-07-22 22:50:31
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