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墨池

银虫 (小有名气)

[求助] 做SRAP标记的进来，DNA聚丙烯酰胺电泳，预电泳问题。。。

DNA，SRAP标记，6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 的预电泳问题：
1  预电泳电压，时间？
2  预电泳好处？
3 为什么同一块胶，两侧的泳道跑的慢，中间跑的快。我们的电泳槽没冷却装置，普通型号的。DYCZ-21型号。



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1楼 2011-07-22 14:46:11
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gwbk

木虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-23 17:17:03
冰浴确实是简单易行的方法。如果可以把整套电泳设备搬到层析柜里面也行~
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9楼2011-07-22 22:50:31
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-22 19:16:38
楼主最近提问很多啊，呵呵~

没有冷却装置很正常，一般都拿冰块去降温：拿个大盘子，先铺一层冰，然后放上电泳槽，最后再用尽可能多的冰块把电泳槽埋起来，当然，别盖过顶，不然冰融了水会流进去。隔段时间检查下，冰融了再换新的。
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2楼2011-07-22 16:59:20
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
其他问题不懂啊，不要问我--！
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3楼2011-07-22 17:00:59
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

【答案】应助回帖

墨池(金币+2): 2011-07-22 20:27:02
引用回帖:
Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 14:46:11:
DNA，SRAP标记，6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 的预电泳问题：
1  预电泳电压，时间？
2  预电泳好处？
3 为什么同一块胶，两侧的泳道跑的慢，中间跑的快。我们的电泳槽没冷却装置，普通型号的。DYCZ-21型号。
...

前两个问题：对于预电泳，有一种解释是为了除去没有聚合完全的丙烯酰胺分子和交联剂，其实最直接的理解就是预电泳会让胶跑的好看一点......预电泳的时间控制在30min左右，电压根据胶的长度来，印象里好像是5~10V/cm，反正100V以下都差不多了，影响不大。
第三个问题：条带弯曲的话，一种原因就是由于没有冷却装置，中间部分温度较高，所以跑的比较快一点。还一种原因是电泳槽的密封性能有问题，某处可能“漏电”了。
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4楼2011-07-22 17:48:00
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