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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 了解蛋白质性质及其熟悉电泳的高手请进！
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落满夏天

银虫 (正式写手)

[求助] 了解蛋白质性质及其熟悉电泳的高手请进！

小弟做一种蛋白的电泳时，遇到一个问题，在主条带的下面有两条杂带，但是同一样品做分子筛液相分析就没有，因此我判断是降解条带，该蛋白分子量大概是20000多点，等电点大概是１１。降解带分子量在一万五左右，有时候有两条，我们用的是变性ＳＤＳ－Page ，蛋白缓冲液是PH 为７.０的Pb 。不知道是什么原因降解，处理的时候是加处理液１００度水浴。不知道大家有没有解决蛋白电泳降解的经验，小弟感激不尽了。蛋白纯化时，离子交换和分子筛都是过的。
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星星之火，可以燎原
1楼 2012-01-09 16:06:13
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落满夏天

银虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-01-10 12:49:12:
分子筛液相的灵敏度没有电泳高，你要是做反相，也许比电泳纯度还低。
蛋白破坏应该是样品缓冲液中的巯基物和sds，我觉得你是纯化的问题，应该是样品不纯。
你可以去除样品缓冲液和电泳缓冲液中的巯基物和sds，跑 ...

样品缓冲液已经是最后的原液，应该没有巯基物了，sds我在考虑，是不是破坏了蛋白结构，原液里没有，电泳缓冲液和处理液是有的。另外该蛋白没有二硫键，活性一直不好，也还在找问题。先谢谢了。
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星星之火，可以燎原
8楼2012-01-11 16:32:58
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2012-01-09 19:59:24
落满夏天(金币+1): 2012-01-11 16:33:24
可能蛋白质样品 是多聚体。靠二硫键结合，在SDS作用下会变性成单聚体。如抗体在SDS PAGE 中就有两条带。
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2楼2012-01-09 18:49:51
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
落满夏天(金币+2): 2012-01-11 16:33:12
分子筛液相的灵敏度没有电泳高，你要是做反相，也许比电泳纯度还低。
蛋白破坏应该是样品缓冲液中的巯基物和sds，我觉得你是纯化的问题，应该是样品不纯。
你可以去除样品缓冲液和电泳缓冲液中的巯基物和sds，跑个电泳看看。
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3楼2012-01-10 12:49:12
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lxh502976898

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.会不会是Marker 在上完样 加缓冲液的时候 溢到相邻的样品槽里
2.沸水加热处理样品没有什么错误，你是怎么确定他会出现降解的可能啊
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4楼2012-01-10 16:36:19
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