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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：蛋白质样品浓度比较小，电泳上样量多少合适呀？
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xfchzh

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助：蛋白质样品浓度比较小，电泳上样量多少合适呀？ 已有14人参与

大家好，我以前没做过蛋白质电泳，现在样品浓度大概0.1μg/μL，上样量多少比较合适呢？用5X样品缓冲液，添加比例是多少呢？ .yF@Ow  
先谢谢大家了！
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1楼 2010-06-23 13:13:12
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月月大可

木虫 (著名写手)
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 14:29:31
考蓝染色的分辨率也就是在微克级别（有资料显示100ng），这样浓度你取20微升就会很明显的条带了。
如果需要更大的蛋白量可以取100微升，加10微升Loading Buffer，沸水煮的时候敞开离心管的盖子（管口尽可能高于浮漂，防止水渐入），让其蒸发部分，也能达到浓缩的效果。煮个十几分钟的，然后再敞开盖子晾一会，上样的时候能上多少上多少。

还需要更大上样量只能使用l超滤管浓缩了。我平常嫌麻烦，轻易不这么做。
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2楼2010-06-23 13:35:47
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
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20-40ug/well........................
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4楼2010-06-23 20:51:59
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普通回帖

zemin_fang

木虫 (正式写手)
5-10ul就足够了。理由楼上说了。
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3楼2010-06-23 17:06:13
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xfchzh

新虫 (小有名气)
谢谢大家！
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5楼2010-06-24 08:33:11
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皓儿smile

铁杆木虫 (小有名气)
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lmzxcom1:吸光度值的方法值得借鉴 2010-06-24 09:59:46
我做电泳，一般在做之前测一下吸收光谱，吸光度大于0.5基本上都能跑出清晰条带。

另外，可以尝试用银染法，银染法的检出限更低。

[ Last edited by 皓儿smile on 2010-6-24 at 09:30 ]
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6楼2010-06-24 09:26:22
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遨游生命

铁杆木虫 (正式写手)
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每孔30-50ug吧，不然太少了跑开后条带的量太少就然不上色了
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7楼2010-06-24 10:35:20
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zhengjiess

木虫 (著名写手)
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我觉得应该再20微克左右比较合适吧
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选择了就不要后悔
8楼2010-07-05 14:49:45
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天外飞仙→顺

铜虫 (小有名气)
20ul就可以了！！  1.0的梳子
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我无法改变自己的出生，但我可以决定自己的命运：命中注定我是一个王者，我必须拿出王者的风范！！！
9楼2010-07-05 15:42:00
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落满夏天

银虫 (正式写手)
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西瓜(金币+1): 鼓励交流 2012-02-05 12:23:25
看你的电泳孔道能装多少样品了,我有一个品种浓度和你这个差不多,我一般加五50微升,25微升的处理液,沸水5分钟处理,最后加20微升,还行吧,条带有点细,个人认为只要能处理彻底就好了.再不行就别嫌麻烦,银染,这个5微克就可以了,很灵敏.
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星星之火，可以燎原
10楼2012-02-02 14:16:47
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