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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：蛋白质样品浓度比较小，电泳上样量多少合适呀？
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xfchzh

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助：蛋白质样品浓度比较小，电泳上样量多少合适呀？ 已有14人参与

大家好，我以前没做过蛋白质电泳，现在样品浓度大概0.1μg/μL，上样量多少比较合适呢？用5X样品缓冲液，添加比例是多少呢？ .yF@Ow  
先谢谢大家了！
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1楼 2010-06-23 13:13:12
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皓儿smile

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lmzxcom1:吸光度值的方法值得借鉴 2010-06-24 09:59:46
我做电泳，一般在做之前测一下吸收光谱，吸光度大于0.5基本上都能跑出清晰条带。

另外，可以尝试用银染法，银染法的检出限更低。

[ Last edited by 皓儿smile on 2010-6-24 at 09:30 ]
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6楼2010-06-24 09:26:22
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 14:29:31
考蓝染色的分辨率也就是在微克级别（有资料显示100ng），这样浓度你取20微升就会很明显的条带了。
如果需要更大的蛋白量可以取100微升，加10微升Loading Buffer，沸水煮的时候敞开离心管的盖子（管口尽可能高于浮漂，防止水渐入），让其蒸发部分，也能达到浓缩的效果。煮个十几分钟的，然后再敞开盖子晾一会，上样的时候能上多少上多少。

还需要更大上样量只能使用l超滤管浓缩了。我平常嫌麻烦，轻易不这么做。
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2楼2010-06-23 13:35:47
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
5-10ul就足够了。理由楼上说了。
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3楼2010-06-23 17:06:13
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
20-40ug/well........................
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4楼2010-06-23 20:51:59
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