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richart

金虫 (正式写手)

[求助] 为什么PAGE电泳跑不出样品中的蛋白质?急求解!!!!

硫酸铵沉淀的蛋白质为什么经SDS-PAGE电泳总是跑不出来?那么多沉淀,MAKER也能跑的比较好,为什么样品一条蛋白的条带都没有呢? 换了各种浓度的胶,各种试剂也配了好多次,为什么还是这样呢?郁闷!请高手指点啊

[ Last edited by silicare on 2011-11-29 at 12:47 ]
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xiaohaizi0220

木虫 (正式写手)

基础研发之沉默

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, BioEPI+1): 不排除这个可能 2011-11-29 12:46:19
richart(金币+5): 谢谢 多向你学习啊 2011-11-29 22:59:53
我也经历过同样的问题。后来发现浓度低。在marker正常的情况下,原因可能有:
1、浓度过低,考马斯亮蓝不能染出来。(换银染)
2、浓度不低,考马斯亮蓝无法染上。因为有一些蛋白考染不上色。(换其他染色方法)
建议你测一下浓度,测一下你的溶液在280nm下吸光度如何。
可能的原因很多,咱们可以多多讨论
有限的我却思考无限的存在
6楼2011-11-28 22:02:39
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普通回帖

wanghai8282

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+8): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-29 12:44:24
richart(金币+5): 2 2011-11-29 23:00:07
需要透析,除去离子。
对水或者缓冲液
2楼2011-11-27 11:15:28
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richart

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wanghai8282 at 2011-11-27 11:15:28:
需要透析,除去离子。
对水或者缓冲液

样品要透析,这个我知道,对水和缓冲液也要透析吗?
3楼2011-11-27 15:29:47
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richart

金虫 (正式写手)

怎么没高手指点啊???
4楼2011-11-28 11:06:55
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guxinhan123

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
silicare(金币+4): 可以更详细一些 2011-11-29 12:45:41
不想透析先用tca/丙酮冲洗一次,然后预冷80%丙酮冲洗两次,loading buffer煮沸上样
5楼2011-11-28 11:26:55
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guxinhan123

银虫 (正式写手)

什么样品?上样多少?硫酸铵沉淀后如何处理?染色出问题的可能性不大,还是感觉盐离子多。
7楼2011-11-29 20:34:46
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