24小时热门版块排行榜    

查看: 2339  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

落满夏天

银虫 (正式写手)

[求助] 了解蛋白质性质及其熟悉电泳的高手请进!

小弟做一种蛋白的电泳时,遇到一个问题,在主条带的下面有两条杂带,但是同一样品做分子筛液相分析就没有,因此我判断是降解条带,该蛋白分子量大概是20000多点,等电点大概是11。降解带分子量在一万五左右,有时候有两条,我们用的是变性SDS-Page ,蛋白缓冲液是PH 为7.0的Pb 。不知道是什么原因降解,处理的时候是加处理液100度水浴。不知道大家有没有解决蛋白电泳降解的经验,小弟感激不尽了。蛋白纯化时,离子交换和分子筛都是过的。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

星星之火,可以燎原
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落满夏天

银虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by lxh502976898 at 2012-01-10 16:36:19:
1.会不会是Marker 在上完样 加缓冲液的时候 溢到相邻的样品槽里
2.沸水加热处理样品没有什么错误,你是怎么确定他会出现降解的可能啊

一的可能性没有,降解的话我是通过液相分子筛确定的,因为电泳上条带分的很远,在分子筛上这种情况一定可以分开,另外我关注电泳已经有一段时间了。应该是降解无疑,只是不知道原因何在,也许是因为有的键键能太低。还在研究中。
星星之火,可以燎原
9楼2012-01-11 16:36:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流! 2012-01-09 19:59:24
落满夏天(金币+1): 2012-01-11 16:33:24
可能蛋白质样品 是多聚体。靠二硫键结合,在SDS作用下会变性成单聚体。如抗体在SDS PAGE 中就有两条带。
2楼2012-01-09 18:49:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
落满夏天(金币+2): 2012-01-11 16:33:12
分子筛液相的灵敏度没有电泳高,你要是做反相,也许比电泳纯度还低。
蛋白破坏应该是样品缓冲液中的巯基物和sds,我觉得你是纯化的问题,应该是样品不纯。
你可以去除样品缓冲液和电泳缓冲液中的巯基物和sds,跑个电泳看看。
3楼2012-01-10 12:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.会不会是Marker 在上完样 加缓冲液的时候 溢到相邻的样品槽里
2.沸水加热处理样品没有什么错误,你是怎么确定他会出现降解的可能啊
4楼2012-01-10 16:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料类求调剂 +6 wana_kiko 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:20 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 284求调剂 +4 天下熯 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:13 by gaoxiaoniuma
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 7/350 2026-02-28 20:42 by 好好好1233
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 5/250 2026-02-28 20:11 by iwuli
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +7 南迦720 2026-02-28 7/350 2026-02-28 18:28 by leonnulll
[考研] 材料学调剂 +4 提神豆沙包 2026-02-28 4/200 2026-02-28 18:26 by houyaoxu
[考研] 材料调剂 +3 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 3/150 2026-02-28 18:06 by houyaoxu
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +3 弗格个 2026-02-28 5/250 2026-02-28 17:04 by sandychj
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考博] 26申博 +3 想申博! 2026-02-26 3/150 2026-02-28 16:07 by nxgogo
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
信息提示
请填处理意见