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落满夏天

银虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by xiaohaizi0220 at 2012-01-11 11:13:32:
先做一个非变性胶跑一下电泳看看。

我在考虑是不是因为sds的关系,因为其他条件不变,不水浴加热的话也是有降解调带的,做活性电泳的话是不是去掉电极液和处理液中的sds。该蛋白紫外扫描超零点几个纳米,活性也一直不好,不知道是不是不稳定的关系。如果您对蛋白活性有研究请指教.
星星之火,可以燎原
11楼2012-01-11 16:44:24
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 落满夏天 at 2012-01-11 16:44:14:
我在考虑是不是因为sds的关系,因为其他条件不变,不水浴加热的话也是有降解调带的,做活性电泳的话是不是去掉电极液和处理液中的sds。该蛋白紫外扫描超零点几个纳米,活性也一直不好,不知道是不是不稳定的关系 ...

sds一般只能破坏亚基结构,沸水浴加热只是加速sds与蛋白结合速度,常温放置一宿还是24小时,不太确定了,也可以达到相同效果。
做活性电泳只要去掉系统里所有的sds即可,不过迁移率不再跟分子量有关联。
你也可以做反相液相,看看成分纯度,反正分子筛分离度很低,我曾买过几个标准蛋白,单个上分子筛液相还行,混在一起就是一塌糊涂,根本分不开。
还可以将分子筛层析蛋白峰分多段收集,跑电泳,看看前中后各段电泳是否有差别。
要是有二极管阵列检测器就好了,直接看看液相组分的光谱图,看看各峰纯度如何。
12楼2012-01-11 19:41:11
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