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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 了解蛋白质性质及其熟悉电泳的高手请进！
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落满夏天

银虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by xiaohaizi0220 at 2012-01-11 11:13:32:
先做一个非变性胶跑一下电泳看看。

我在考虑是不是因为sds的关系，因为其他条件不变，不水浴加热的话也是有降解调带的，做活性电泳的话是不是去掉电极液和处理液中的sds。该蛋白紫外扫描超零点几个纳米，活性也一直不好，不知道是不是不稳定的关系。如果您对蛋白活性有研究请指教.
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星星之火，可以燎原
11楼2012-01-11 16:44:24
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 落满夏天 at 2012-01-11 16:44:14:
我在考虑是不是因为sds的关系，因为其他条件不变，不水浴加热的话也是有降解调带的，做活性电泳的话是不是去掉电极液和处理液中的sds。该蛋白紫外扫描超零点几个纳米，活性也一直不好，不知道是不是不稳定的关系 ...

sds一般只能破坏亚基结构，沸水浴加热只是加速sds与蛋白结合速度，常温放置一宿还是24小时，不太确定了，也可以达到相同效果。
做活性电泳只要去掉系统里所有的sds即可，不过迁移率不再跟分子量有关联。
你也可以做反相液相，看看成分纯度，反正分子筛分离度很低，我曾买过几个标准蛋白，单个上分子筛液相还行，混在一起就是一塌糊涂，根本分不开。
还可以将分子筛层析蛋白峰分多段收集，跑电泳，看看前中后各段电泳是否有差别。
要是有二极管阵列检测器就好了，直接看看液相组分的光谱图，看看各峰纯度如何。
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12楼2012-01-11 19:41:11
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