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落满夏天

银虫 (正式写手)

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[求助] 了解蛋白质性质及其熟悉电泳的高手请进！

小弟做一种蛋白的电泳时，遇到一个问题，在主条带的下面有两条杂带，但是同一样品做分子筛液相分析就没有，因此我判断是降解条带，该蛋白分子量大概是20000多点，等电点大概是１１。降解带分子量在一万五左右，有时候有两条，我们用的是变性ＳＤＳ－Page ，蛋白缓冲液是PH 为７.０的Pb 。不知道是什么原因降解，处理的时候是加处理液１００度水浴。不知道大家有没有解决蛋白电泳降解的经验，小弟感激不尽了。蛋白纯化时，离子交换和分子筛都是过的。

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星星之火，可以燎原

1楼 2012-01-09 16:06:13

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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

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引用回帖:

10楼: Originally posted by 落满夏天 at 2012-01-11 16:44:14:
我在考虑是不是因为sds的关系，因为其他条件不变，不水浴加热的话也是有降解调带的，做活性电泳的话是不是去掉电极液和处理液中的sds。该蛋白紫外扫描超零点几个纳米，活性也一直不好，不知道是不是不稳定的关系 ...

sds一般只能破坏亚基结构，沸水浴加热只是加速sds与蛋白结合速度，常温放置一宿还是24小时，不太确定了，也可以达到相同效果。
做活性电泳只要去掉系统里所有的sds即可，不过迁移率不再跟分子量有关联。
你也可以做反相液相，看看成分纯度，反正分子筛分离度很低，我曾买过几个标准蛋白，单个上分子筛液相还行，混在一起就是一塌糊涂，根本分不开。
还可以将分子筛层析蛋白峰分多段收集，跑电泳，看看前中后各段电泳是否有差别。
要是有二极管阵列检测器就好了，直接看看液相组分的光谱图，看看各峰纯度如何。