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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 蛋白质 电泳 活性？
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殷灿灿

新虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质 电泳 活性？

利用电泳法测蛋白质 的组成及含量，跑电泳时需要保证蛋白质的活性吗
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1楼 2012-04-27 20:54:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dodogougou

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
树树8013: 回帖置顶 2012-04-29 12:05:18
树树8013: 金币+2, 谢谢耐心交流，欢迎常关注食品板块。 2012-04-29 12:05:50
不需要，也不容易保证蛋白质的活性。保证蛋白质的活性要保证蛋白质有正确的二级结构，高温、变性剂等因素很容易破坏蛋白质的二级结构，电泳放热容易使局部温度过高。更何况通常会故意让蛋白质变性，例如SDS-PAGE。

SDS-PAGE分离蛋白质要用SDS处理，使蛋白质形成带大量负电荷的长棒状分子，还原法SDS-PAGE还要用二硫苏糖醇（DTT）之类的还原剂把二硫键还原成巯基。这样做的目的是使蛋白质在电泳中按照分子量大小分离开，而不必考虑蛋白质原有的构型。如果是组成比较简单的蛋白质样品，与样品在同一张胶上同时跑一组蛋白质分子量标准，然后对电泳后的凝胶进行考马斯亮蓝染色，用分析软件分析条带浓度就可以了，但只是知道某种蛋白质含量的相对情况，不是准确定量。如果是组成比较复杂的蛋白质样品，可能还要转膜进行Western-Blotting，甚至有的会需要进行双向电泳。步骤中很多变性因素的。

除非有必要保留生物活性样品，可以用非变性电泳，注意操作条件。但这样的情况，电泳时蛋白质条带位置的影响因素会比较多。

[ Last edited by dodogougou on 2012-4-28 at 09:54 ]
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15楼2012-04-28 09:32:44
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普通回帖

chenzhenjia

木虫 (著名写手)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
不需要，用分析软件分析就可以。
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殷灿灿
2楼2012-04-27 21:21:20
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殷灿灿

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenzhenjia at 2012-04-27 21:21:20:
不需要，用分析软件分析就可以。

能具体解释下原因吗
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3楼2012-04-27 21:29:39
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tangbohejin

木虫之王 (文学泰斗)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
用软件
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7楼2012-04-27 22:39:24
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majiaona

木虫 (著名写手)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
不需要吧，因为老师上课讲电泳时没有说对蛋白质有这方面要求
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8楼2012-04-27 22:50:26
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chenzhenjia

木虫 (著名写手)
电泳主要分析亚基组成和含量，亚基之间的二硫键在电泳之前需要打断，因此大部分电泳再电泳之前是要将蛋白质煮沸5分钟的。
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9楼2012-04-27 22:56:37
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yanbaobao

木虫 (正式写手)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
祝福楼主

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2012-04-27 23:09:56
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leimiao_hit

木虫之王 (文学泰斗)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
不需要
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11楼2012-04-27 23:35:01
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qiaqia832

铜虫 (正式写手)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
树树8013: 回帖置顶 2012-04-29 12:04:57
我只做过变性的SDS-PAGE电泳，那个可以通过软件分析得到蛋白质或者多肽分子的分子质量，不知道你要算什么含量，用考马斯测蛋白含量不行吗？蛋白质的组成不应该那电泳测吧，得用氨基酸分析吧
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12楼2012-04-28 08:25:36
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ewuyanfei

木虫 (职业作家)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
帮顶一个：）祝一切顺利：）
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13楼2012-04-28 08:52:04
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humanbeeing

木虫 (著名写手)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
要看LZ的目的
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16楼2012-04-28 09:57:06
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泡泡茶

金虫 (正式写手)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
比如SDS-PAGE，sds会使蛋白质变性
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17楼2012-04-28 11:31:57
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lingyin87

新虫 (初入文坛)
★
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
不需要吧，除非你要电泳分离开之后再切胶做活性研究
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18楼2012-04-28 13:11:45
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zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)
不需要的
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19楼2012-04-28 17:09:21
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简单回复
yaoyaozhd4楼
2012-04-27 22:11   回复  
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
守着风儿5楼
2012-04-27 22:34   回复  
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
harbor20106楼
2012-04-27 22:38   回复  
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
假大空14楼
2012-04-28 09:00   回复  
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
祝福
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