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[交流]
蛋白质 电泳 活性？
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| 利用电泳法测蛋白质 的组成及含量，跑电泳时需要保证蛋白质的活性吗 |
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殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
树树8013: 回帖置顶 2012-04-29 12:05:18
树树8013: 金币+2, 谢谢耐心交流，欢迎常关注食品板块。 2012-04-29 12:05:50
殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
树树8013: 回帖置顶 2012-04-29 12:05:18
树树8013: 金币+2, 谢谢耐心交流，欢迎常关注食品板块。 2012-04-29 12:05:50
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不需要，也不容易保证蛋白质的活性。保证蛋白质的活性要保证蛋白质有正确的二级结构，高温、变性剂等因素很容易破坏蛋白质的二级结构，电泳放热容易使局部温度过高。更何况通常会故意让蛋白质变性，例如SDS-PAGE。 SDS-PAGE分离蛋白质要用SDS处理，使蛋白质形成带大量负电荷的长棒状分子，还原法SDS-PAGE还要用二硫苏糖醇（DTT）之类的还原剂把二硫键还原成巯基。这样做的目的是使蛋白质在电泳中按照分子量大小分离开，而不必考虑蛋白质原有的构型。如果是组成比较简单的蛋白质样品，与样品在同一张胶上同时跑一组蛋白质分子量标准，然后对电泳后的凝胶进行考马斯亮蓝染色，用分析软件分析条带浓度就可以了，但只是知道某种蛋白质含量的相对情况，不是准确定量。如果是组成比较复杂的蛋白质样品，可能还要转膜进行Western-Blotting，甚至有的会需要进行双向电泳。步骤中很多变性因素的。  除非有必要保留生物活性样品，可以用非变性电泳，注意操作条件。但这样的情况，电泳时蛋白质条带位置的影响因素会比较多。 [ Last edited by dodogougou on 2012-4-28 at 09:54 ] |
15楼2012-04-28 09:32:44
殷灿灿2楼2012-04-27 21:21:20
3楼2012-04-27 21:29:39
7楼2012-04-27 22:39:24
8楼2012-04-27 22:50:26
9楼2012-04-27 22:56:37
10楼2012-04-27 23:09:56
11楼2012-04-27 23:35:01
12楼2012-04-28 08:25:36
13楼2012-04-28 08:52:04
16楼2012-04-28 09:57:06
17楼2012-04-28 11:31:57
18楼2012-04-28 13:11:45
19楼2012-04-28 17:09:21
简单回复
2012-04-27 22:11
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殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
守着风儿5楼
2012-04-27 22:34
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殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
2012-04-27 22:38
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殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
假大空14楼
2012-04-28 09:00
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殷灿灿(金币+3): 谢谢参与
祝福