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viviantuntun

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白质样品溶液中离子浓度对蛋白质电泳的影响

利用分子筛进行蛋白质纯化时,选用的缓冲液是20mmol PBS 和0.1mol NaCl,收集的样品浓缩十倍后复溶进行蛋白电泳,那缓冲液中离子强度会不会影响蛋白电泳效果?非常感谢!!!

[ Last edited by viviantuntun on 2012-10-8 at 09:24 ]
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lanziliuli

银虫 (小有名气)

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viviantuntun: 金币+1, 有帮助 2012-10-08 19:25:48
会有影响,导致电压上不去,电泳图中也可能会出现条纹
做好科研
2楼2012-10-08 10:51:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
viviantuntun: 金币+1, 有帮助 2012-10-08 19:25:55
如果做SDS-PAGE的话,你的溶液有一点影响,但胶不会很难看。如果是做非变性胶的话,影响会比较大。
3楼2012-10-08 14:27:01
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viviantuntun

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-08 14:27:01
如果做SDS-PAGE的话,你的溶液有一点影响,但胶不会很难看。如果是做非变性胶的话,影响会比较大。

我跑的是Tricine-SDS-PAGE,非变性胶和变性胶的区别是?谢谢!
4楼2012-10-08 16:10:00
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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viviantuntun: 金币+1, 有帮助 2012-10-08 19:25:18
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-10-09 15:42:17
我上次试过将1ml的1*PBS的蛋白样品浓缩到50ul的样品去跑变性PAGE…………
结果点进去就发现不对劲,沉的特别快,然后跑电泳的时候发现悲剧了,点样孔里面的样品跑不出来,最后加大电压才勉强跑出来了,跑的时间也相应加长了,最后PAGE图好丑- -
一点实验经历,楼主参考……
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
5楼2012-10-08 16:29:55
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

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viviantuntun: 金币+1, 有帮助 2012-10-08 19:25:33
很想知道你怎么浓缩,如果是用膜浓缩不会有影响啊,除非是蛋白浓度高,盐浓度不会变,盐离子跟蛋白怎么比得了?
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
6楼2012-10-08 18:08:10
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

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如果不是有特殊要求,分子筛没必要加氯化钠。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2012-10-09 03:10:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by viviantuntun at 2012-10-08 16:10:00
我跑的是Tricine-SDS-PAGE,非变性胶和变性胶的区别是?谢谢!...

非变性胶就是用温和的detergent处理增溶样品,蛋白没有变性的条件下电泳。你的上样buffer里面有SDS就是把蛋白变性了跑的。
8楼2012-10-09 08:54:06
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viviantuntun

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 08:54:06
非变性胶就是用温和的detergent处理增溶样品,蛋白没有变性的条件下电泳。你的上样buffer里面有SDS就是把蛋白变性了跑的。...

我的是变性处理样品,看来还是会有影响。
9楼2012-10-09 10:55:39
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璐小暖

新虫 (初入文坛)

我是先用离子交换层析对蛋白进行提纯

提纯前的蛋白质溶液时有条带的

可是层析提纯后,在电泳就没有条带了

是溶剂换掉的问题么

又遇到过这种情况的么,求各路大神赐教
10楼2018-01-23 19:40:03
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