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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质样品溶液中离子浓度对蛋白质电泳的影响
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viviantuntun

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白质样品溶液中离子浓度对蛋白质电泳的影响

利用分子筛进行蛋白质纯化时，选用的缓冲液是20mmol PBS 和0.1mol NaCl，收集的样品浓缩十倍后复溶进行蛋白电泳，那缓冲液中离子强度会不会影响蛋白电泳效果？非常感谢！！！

[ Last edited by viviantuntun on 2012-10-8 at 09:24 ]
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1楼 2012-10-08 09:22:06
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lanziliuli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
viviantuntun: 金币+1, ★有帮助 2012-10-08 19:25:48
会有影响，导致电压上不去，电泳图中也可能会出现条纹
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做好科研
2楼2012-10-08 10:51:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
viviantuntun: 金币+1, ★有帮助 2012-10-08 19:25:55
如果做SDS-PAGE的话，你的溶液有一点影响，但胶不会很难看。如果是做非变性胶的话，影响会比较大。
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3楼2012-10-08 14:27:01
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viviantuntun

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-08 14:27:01
如果做SDS-PAGE的话，你的溶液有一点影响，但胶不会很难看。如果是做非变性胶的话，影响会比较大。

我跑的是Tricine-SDS-PAGE，非变性胶和变性胶的区别是？谢谢!
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4楼2012-10-08 16:10:00
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
viviantuntun: 金币+1, ★有帮助 2012-10-08 19:25:18
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-10-09 15:42:17
我上次试过将1ml的1*PBS的蛋白样品浓缩到50ul的样品去跑变性PAGE…………
结果点进去就发现不对劲，沉的特别快，然后跑电泳的时候发现悲剧了，点样孔里面的样品跑不出来，最后加大电压才勉强跑出来了，跑的时间也相应加长了，最后PAGE图好丑- -
一点实验经历，楼主参考……
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5楼2012-10-08 16:29:55
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
viviantuntun: 金币+1, ★有帮助 2012-10-08 19:25:33
很想知道你怎么浓缩，如果是用膜浓缩不会有影响啊，除非是蛋白浓度高，盐浓度不会变，盐离子跟蛋白怎么比得了？
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
6楼2012-10-08 18:08:10
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果不是有特殊要求，分子筛没必要加氯化钠。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2012-10-09 03:10:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by viviantuntun at 2012-10-08 16:10:00
我跑的是Tricine-SDS-PAGE，非变性胶和变性胶的区别是？谢谢!...

非变性胶就是用温和的detergent处理增溶样品，蛋白没有变性的条件下电泳。你的上样buffer里面有SDS就是把蛋白变性了跑的。
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8楼2012-10-09 08:54:06
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viviantuntun

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-09 08:54:06
非变性胶就是用温和的detergent处理增溶样品，蛋白没有变性的条件下电泳。你的上样buffer里面有SDS就是把蛋白变性了跑的。...

我的是变性处理样品，看来还是会有影响。
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9楼2012-10-09 10:55:39
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璐小暖

新虫 (初入文坛)
我是先用离子交换层析对蛋白进行提纯

提纯前的蛋白质溶液时有条带的

可是层析提纯后，在电泳就没有条带了

是溶剂换掉的问题么

又遇到过这种情况的么，求各路大神赐教
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10楼2018-01-23 19:40:03
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