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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 电泳胶片原因分析，如图所示
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zjt829

木虫 (正式写手)

[求助] 电泳胶片原因分析，如图所示

SDS-page电泳跑出的结果如下，请大家帮忙分析一下原因吧，谢了~
蛋白：植物组织蛋白提取液（用tris-HCl的方法提的，然后直接与上样缓冲液混合之后上样）
最左边marker：170KD-10KD
请分析

12%分离胶+6%浓缩胶

[ Last edited by zjt829 on 2012-8-23 at 18:11 ]
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淡泊志宁静远
1楼 2012-08-23 18:04:05
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zjt829

木虫 (正式写手)
为什么没人来回答呢
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淡泊志宁静远
2楼2012-08-23 20:37:10
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjt829: 金币+2 2012-08-24 10:54:22
似乎提取效果不佳啊，都拖尾了。此外，楼主你的胶哪是上哪是下啊？
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3楼2012-08-23 22:58:38
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjt829: 金币+2, 说错了，右边的是marker，呵呵，样品没提好？？？ 2012-08-24 10:55:01
同意楼上的，看上去最右边的是marker，分离得很清晰，而不像楼主说的左边是marker。
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4楼2012-08-24 00:35:28
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yyk81

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjt829: 金币+5, ★有帮助, 这个胶片上的蛋白量看起来应该不算少吧？ 2012-08-24 10:56:33
SDSPAGE中样品跑不出加样孔最主要的原因是样本太浓而且含有不溶性物质，解决方案:1、适当稀释样品; 2、加入上样缓冲液后煮沸时间要保证，且一定要充分离心，只取上清上样。我一般是煮沸5-10分钟，13000rpm离心3-5分钟。
当然还有其他原因，比如:样品pH值不合适、上样缓冲液中SDS析出。但这些问题很容易肉眼看到，不易发生。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学无止境！
5楼2012-08-24 07:38:44
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zjt829

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-23 22:58:38
似乎提取效果不佳啊，都拖尾了。此外，楼主你的胶哪是上哪是下啊？

上面的顺序就是正常的上下顺序啊
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淡泊志宁静远
6楼2012-08-24 10:53:56
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zjt829

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-23 22:58:38
似乎提取效果不佳啊，都拖尾了。此外，楼主你的胶哪是上哪是下啊？

这就是上下顺序
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淡泊志宁静远
7楼2012-08-24 10:54:15
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zjt829

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-23 22:58:38
似乎提取效果不佳啊，都拖尾了。此外，楼主你的胶哪是上哪是下啊？

您是说蛋白没提取出来么？但是最上面那一堆蓝色不是蛋白的么？
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淡泊志宁静远
8楼2012-08-24 11:07:35
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
zjt829: 金币+2, 多谢 2012-08-25 20:26:31
引用回帖:
8楼: Originally posted by zjt829 at 2012-08-24 11:07:35
您是说蛋白没提取出来么？但是最上面那一堆蓝色不是蛋白的么？...

提是提出来了，但是，蛋白有SMEAR.......
第二块胶似乎又没跑动，楼主先把蛋白稀释一倍，跑长点时间再看。
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9楼2012-08-24 14:06:02
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wenzonglu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与，能考虑到植物的特殊性 2012-08-25 03:18:00
zjt829: 金币+5, 多谢，处理方法呢，能提示一下么？ 2012-08-25 09:45:27
标准条带跑出来很清楚，样品没见好的条带，原因可能是：一、提取过程出现蛋白断裂导致样品带有弥散状。二、植物蛋白大多数不是单独存在，会结合像多糖等成分，不易分开导致分子量很大电泳跑不开。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2012-08-24 22:43:06
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