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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » trizol法手提虾肠道RNA电泳图，求分析
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pzyzj

新虫 (初入文坛)

[求助] trizol法手提虾肠道RNA电泳图，求分析

手提法提的虾肠道总RNA，测浓度之后有1700ng/ul ，但是跑电泳结果不好，很亮的拖尾不知道是什么东西，marker是100bp的，求分析
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1楼 2012-05-18 18:37:26
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, Good！ 2012-05-20 18:39:13
嗯.......................
       1. 不明白为什么大家都不怎么喜欢测OD 正常流程均是OD完再电泳 若OD时观察230 280 320与260比值确定是否有杂质再电泳会比较好
       2. 有这么种说法 RNA电泳 条带上Smear一般是gDNA污染 条带下Smear一般会是降解造成的 你这个下方过亮且第一条带和过亮区域之间有等长的三条带（第二样品比较清楚）这种亮度都可能不算Smear了 观察marker也并不是你曝光问题
       3. 电泳前有没有好好处理槽子 制胶器？有没有预跑胶？
       个人看法 可能是杂质影响 或者你这个本身大部分电泳条带就不是RNA的
       若有说错请高手指点
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Let God do with it as He wills
2楼2012-05-18 22:55:17
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ncaty

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可否告知一下跑电泳时稀释的倍数?
看起来很多杂质, 一般我们跑RNA电泳之前都会换新的电泳液的.
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3楼2012-05-18 23:04:53
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pzyzj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-18 22:55:17:
嗯.......................
       1. 不明白为什么大家都不怎么喜欢测OD 正常流程均是OD完再电泳 若OD时观察230 280 320与260比值确定是否有杂质再电泳会比较好
       2. 有这么种说法 RNA电泳 条带上Smear一 ...

260/280大概是2.0，OD是电泳之前测的，开始以为是浓度太高了才会拖尾那么严重，但稀释10倍之后去跑电泳还是这样，那么亮的拖尾是不是蛋白质之类的残留很多啊？  手提法应该怎样才能提的纯一些？
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4楼2012-05-19 14:57:30
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pzyzj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ncaty at 2012-05-18 23:04:53:
可否告知一下跑电泳时稀释的倍数?
看起来很多杂质, 一般我们跑RNA电泳之前都会换新的电泳液的.

电泳液每次都要换得么？  你们跑的电压和时间是多少啊？
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5楼2012-05-19 14:59:01
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julin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-20 18:39:25
看你的电泳Maker跑的效果也不是很理想，怀疑是你的样品有降解的可能，用Trizol提取总RNA杂志会比较多，不知道你的260/230是多少呢，如果值小的话，那可能杂质太多了，我们在用Trizol提取RNA时，搜使用了改良的方法，查查文献，试着改良一下吧
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6楼2012-05-20 09:15:42
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pzyzj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by julin1002 at 2012-05-20 09:15:42:
看你的电泳Maker跑的效果也不是很理想，怀疑是你的样品有降解的可能，用Trizol提取总RNA杂志会比较多，不知道你的260/230是多少呢，如果值小的话，那可能杂质太多了，我们在用Trizol提取RNA时，搜使用了改良的方法 ...

看了好多文献，感觉方法都差不多，能告诉我你们改进了那些步骤么，实验急需啊，十分感谢
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7楼2012-05-20 13:17:32
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ncaty

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by pzyzj at 2012-05-19 14:59:01:
电泳液每次都要换得么？  你们跑的电压和时间是多少啊？

每次跑RNA必定换, 跑RNA用的是70V,40min.
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8楼2012-05-20 18:30:04
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julin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by julin1002 at 2012-05-20 09:15:42:
看你的电泳Maker跑的效果也不是很理想，怀疑是你的样品有降解的可能，用Trizol提取总RNA杂志会比较多，不知道你的260/230是多少呢，如果值小的话，那可能杂质太多了，我们在用Trizol提取RNA时，搜使用了改良的方法，

我们提取的是植物和动物，动物你可试试加入高盐和10%-20%的无水乙醇，高盐可以在加入Trizol后，充分混匀，以1:5加入5M的Nacl,试试看看
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9楼2012-05-21 14:44:48
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sd3824289

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
明显的DNA污染，条带很明显，建议重新提一下
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坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
10楼2012-05-21 16:04:48
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