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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 昆虫RNA 提取！电泳图，看不懂！请高手指点！
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鲲鹏展翅

新虫 (初入文坛)

[求助] 昆虫RNA 提取！电泳图，看不懂！请高手指点！

用trizol法 提取小菜蛾体内RNA ，marker是2000bp的！跑出来的电泳，不知道什么东西？ 除了什么原因？
（本实验室无分子实验经验，本人从0开始！悲催的！啥也不懂啊！）



请各位高手指点！
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1楼 2011-10-31 07:44:52
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

【答案】应助回帖

鲲鹏展翅(金币+1): 非常感谢您帮助 2011-10-31 12:20:48
RNA降解了，提取的器皿要用DEPC水浸泡，玻璃和金属器皿200度高温2小时处理。耗材买RNase free的
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2楼2011-10-31 08:29:54
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫
★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-11-17 12:17:03
论坛里关于RNA提取的帖子：
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3212737&fpage=1
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3楼2011-10-31 08:34:37
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独自干杯

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:17:17
降解了，提取温度也应该低一些，提取用具要用DEPC水泡，提取速度要快。
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4楼2011-10-31 10:03:30
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鲲鹏展翅

新虫 (初入文坛)
谢谢各位帮助！
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5楼2011-10-31 12:22:02
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447585565

木虫 (正式写手)
降解的很厉害~~！
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6楼2011-10-31 16:27:21
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)
都已经降解啦 所有东西都要在无RANase条件下进行
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7楼2011-11-05 14:34:24
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
silicare(金币+4): 鼓励新虫发帖交流 2011-11-17 12:17:53
是否为普通琼脂糖电泳？
如为普通的琼脂糖凝胶电泳（检测RNA）可以不用跑那么久。以下为我的电泳条件：（最好用RNA专用的电泳槽，新配电泳液。）
上样量：小孔约200ng（中孔可上500-1000ng）1.5% gel， 约7-8V/cm，电泳15-20min(溴芬兰跑离孔约2cm)
EB染色5min。

提取过程严格按RNA操作要求操作。东西肯定要干净这个不用说的了，另外注意一要快，二要低温！ 可取些动物肝脏多操作几次练练手。
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伟大航线....
8楼2011-11-10 20:29:26
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cyz20050505

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
silicare(金币+3): 谢谢参与 2011-11-17 12:18:15
先用液氮研磨组织，组织别太多，研磨充分后（期间要一直有液氮保持低温）将组织粉末连同未挥发完的液氮一并倒入玻璃匀浆器（预习加入troznl试剂，并置于冰上），然后直接磨其他组织，待化开后，开始匀浆，匀浆充分后就可以开始提取了。玻璃和铁制器皿200度干烤3个小时，有机试剂不用处理，水必须是DEPC处理的水，EP管和枪头最后买公司生产的RNase-free的管，没有的话，也用DEPC处理。电泳变性不变性没有影响，我甚至用普通的EP管装RNA，也没见它降解。根据我个人经验，前期研磨和匀浆是至关重要的一步。操作带手套，口罩，穿大褂。
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9楼2011-11-17 10:48:31
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wansanlian

金虫 (小有名气)
我们也是从0过来的,没事,你慢慢做的话应该会好了,我之前做的时候跑的也跟你的第一个图一样的,但是第二个图的时候你再少加点量看下会不会看的清,如果条带很靠后,基本上都是己经降解了的呢~一般28S会在1.5K左右的位置
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乱花渐欲迷人眼
10楼2012-05-09 13:15:51
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