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新手提RNA，电泳图看不懂
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今天第一次提RNA，用普通琼脂糖凝胶1.6%，电压为180V，跑了电泳图，看不懂是啥意思，最下面那个很亮的地方是什么东西？是降解了么？但是又不像是拖带啊？请各位前辈指点指点，能用此RNA做反转录么？万分感谢！![](\"//muchongimg.xmcimg.com/data/edu/a1/ca/1528487_1324815338_320.jpg#opennewwindow\") 图一、电泳5min时的图片 ![](\"//muchongimg.xmcimg.com/data/edu/a2/0b/1528487_1324815333_888.jpg#opennewwindow\") 图二、电泳10min时的图片 |
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dnaxxx
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3楼2011-12-26 07:09:40
【答案】应助回帖
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-26 11:44:04
zhouxw1987(金币+2): ★★★很有帮助 2011-12-27 20:30:11
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zhouxw1987(金币+2): ★★★很有帮助 2011-12-27 20:30:11
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首先你上样量肯定有点多相对你此胶的点样孔来说。你小孔的胶先测一下OD，上200-300ng就可以了，上多了就会跑成这样。 其次你的电泳可能有点大，10min跑了那么远，一般要了20-25min才能跑这样的距离。电压是以几伏每厘米来说的，不是以电泳仪显示的总电压来说。电泳槽有10cm\20cm\30cm等等的规格，如果你是180v，则分别为18v/cm,9v/cm,6v/cm了，完全不同的概念。 最后，你的loading如果不是你点多了就是你的二甲苯青和溴酚兰加多了，多到都有点影响判断条带了。6Xloading 你就按1：5跟你的样品混混上就行了。新手最好也点个marker（DL2000） |
6楼2011-12-26 09:28:38
haiven
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【答案】应助回帖
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): 180V确实偏高了。测OD是好方法，本人现在都直接测OD省略电泳了。 2011-12-28 12:52:32
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): 180V确实偏高了。测OD是好方法，本人现在都直接测OD省略电泳了。 2011-12-28 12:52:32
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RNA电泳不宜跑太高的电压，毕竟不是PCR产物。这个在每个实验室都会有个经验值的，多问问，或者自己多摸索一下。 然后上样之前，对RNA定量一下，很方便的，用NanoDrop，1-2uL就可以了，同时还可以看出你的RNA的质量如何。这方面的资料很多了，你上网随便搜搜就找得到的。做实验之前，要把这些原理和方法多了解，然后设计和计划一下实验怎么做，这样实验的效率也就高多了。 |
13楼2011-12-27 08:29:15
【答案】应助回帖
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励完整应助 2011-12-27 21:21:39
wanhscn(金币+3): 鼓励完整应助 2011-12-27 21:21:39
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基因组DNA 0.6% gel 4-5v/cm gDNA大，要慢慢跑出来才漂亮。 1-5kb DNA 1%gel 5-8v/cm 随便跑跑即可 200-500bp 2% 约6v/cm 问题不大。 至于RNA电泳（普通琼脂糖，非变性），因为怕它电泳时间过长，降解，所以感觉上电泳时间控制在30min以内会比较好。 1-1.5%的胶都有人用， 7v/cm左右差不多，在溴酚兰跑出来1-2cm。不同大小的点样孔上不同的量（小孔建议200ng） 多跑几次自己摸索摸索，找出自己最适合的条件。 |
9楼2011-12-26 11:21:06
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